基因擴增儀的的分類及PCR的創建
按照DNA擴增時升溫介質的差異,PCR儀可以被分為變溫式流式PCR儀、水浴式PCR儀以及變溫鋁塊式PCR儀。
變溫式流式PCR儀
原理:按照空氣流的動力學原理,將冷熱氣流作為介質來對溫度進行升降。
優點:改變溫度的速度非??欤辛己玫臄U增效果,對于微量、快速PCR非常適用。形狀不能限制反應器,也沒有必要在管外涂液體石蠟。復雜的變溫程序可以使用電腦很容易地設定。重量較輕的便攜式儀器可以很輕易地被制作成功,對于外出作業很適用。
缺點:把室內溫度作為溫度的下限,很難控制低溫,具有很多的空氣流的動力學要求,為了讓各管溫度均勻,需要精心的設計。
水浴式PCR儀
原理:水浴式PCR儀本身有3個不同溫度的水浴,用機械裝置將帶有反應管的架子移位和升降溫度,使溫度循環。
優點:導熱介質為水,有很大的熱容量,可以使溫度保持均衡。對于反應管的形狀不作特殊的要求,有很穩定的擴增效果以及溫度改變迅速。擴增產物具有良好的特異性以及運行效率較高。
缺點:高溫水浴不穩定,水面需要涂上液體石蠟。需要花較長的時間才能改變水浴溫度,復雜程序(如套式PCR)的操作不容易被實施,有較大的體積,溫度下限受到室內溫度的影響。
變溫鋁塊式PCR儀
原理:熱源是由電阻絲、導電熱膜、熱泵式珀爾帖半導體元件制作制作而成。升溫帶有凹孔的鋁塊,使用自來水、制冷壓縮機或半導體來降溫。
優點:導熱性能好,各管的擴增有良好的一致性,當反應管規格相同時,不需要將石蠟油涂在管外,溫度轉換能夠使用微電腦來進行調節。在擴增完成后,儀器制冷部件可以把溫度降到4攝氏度,保存樣品過夜。
缺點:壓縮機制冷重量大、啟動慢、滯后時間長。鋁塊顯示溫度要領xian管內反應液溫度,反應管需要特制且與鋁塊凹孔形狀緊密吻合并且薄壁耐。當溫度改變時,鋁塊的熱容量不能夠很快旳克服。
PCR的創建
核酸體外擴增的設想Z早是由Khorana 在1971提出的?!敖汥NA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復該過程便可合成tRNA基因?!?/span>
然而當時還沒有成熟的基因序列分析方法,也沒有熱穩定DNA聚合酶以及引物合成操作很困難。這種設想達不到實際的效果。并且在70年代初出現了分子克隆技術,一種克隆和擴增基因的途徑被提供了,因此人們遺忘了Khorana的設想。
1985年,Kary Mullis在Cetus公司工作期間,發明了PCR。Mullis要合成DNA引物來進行測序工作,卻常為沒有足夠多的模板DNA而煩惱。
1983年4月的一個星期五晚上,他開車去鄉下別墅的路上,猛然閃現出“多聚酶鏈式反應”的想法。
1983年12月,Mullis用同位素標記法看到了10個循環后的49 bp長度的diyi個PCR片段;
1985年10月25日申請了PCR的ZL,1987年7月28日批準(ZL號4,683,202 ),Mullis是diyi發明人;
1985年12月20日在Science雜志上發表了diyi篇PCR的學術論文,Mullis是共同作者;
1986年5月,Mullis在冷泉港實驗室做ZT報告,全世界從此開始學習PCR的方法。
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