細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術，指的是細胞在體外條件下的生長，在培養(yǎng)的過程中細胞不再形成組織，培養(yǎng)物是單個細胞或細胞群。細胞在培養(yǎng)時都要生活在人工環(huán)境中，由于環(huán)境的改變，細胞可能會受一些其他因素的影響，從而導致在細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)各種各樣的問題，常見問題有哪些呢？

一、懸浮細胞成簇
可能原因：

?培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子；

?支原體污染；

?蛋白酶過度消化使得細胞裂解；

?DNA污染；

解決方法：

?用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液；

?分離培養(yǎng)物，檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

?用DNase I處理細胞

二、培養(yǎng)細胞不貼壁
可能原因：

?胰蛋白酶消化過度；

?支原體污染；

?培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；

?細胞老化；

?接種細胞起始濃度太低或太高。

解決方法：

?縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；

?分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

?使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2；

?啟用新的保種細胞；

?調節(jié)最 佳接種細胞濃度。

三、培養(yǎng)細胞生長緩慢
可能原因：

?由于更換不同培養(yǎng)液或血清；

?培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；

?培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；

?試劑保存不當；

?接種細胞起始濃度太低；

?細胞已老化；

?支原體污染 。

解決方法：

?比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗，讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；

?換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補加谷氨酰胺及生長因子；

?用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；

?血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；

?增加接種細胞起始濃度；

?換用新的保種細胞；

?分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

四、培養(yǎng)細胞死亡
可能原因：

?培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；

?培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；

?細胞凍存或復蘇過程中損傷；

?培養(yǎng)液滲透壓不正確；

?培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積。

解決方法：

?檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；

?檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；

?取新的保存細胞種；

?檢測培養(yǎng)液滲透壓；

?換入新鮮培養(yǎng)液。