增加了大腸菌群測試片法（貨號：TS002），并明確測試片的檢驗原理應以發酵乳糖產酸產氣為陽性結果判斷依據，且性能符合 GB4789.28 中相關培養基的質量要求。 

    1. 在平板法 9.2 接種與培養中對乳制品培養溫度進行修訂，增加“對于乳及乳制品，應置于 30℃±1℃ 培養 18h~ 24h 。”這是基于國外早有報道30 ℃培養數值明顯高于36 ℃培養的數值。并且，ISO 4832:2006、BAM Chapter 4-2020、APHA:Standard methods for the examination of dairy products（乳品檢驗標準方法)等國際重要標準中，均要求乳制品使用30 ℃～32 ℃培養。標準修訂者們通過大量試驗數據，證明我國乳制品樣品，無論使用VRBA（貨號：GF1002）還是大腸菌群計數測試片（貨號：TS002），采用30 ℃培養數值均顯著高于36 ℃培養數值。所以標準修訂者考慮到我國培養習慣，將乳制品培養溫度定為30 ℃。

     2. 明確MPN計數法初發酵試驗，如接種體積超過 1 mL ，則加到等體積的雙料LST肉湯（貨號：GZ1010.10A）中。例如要接種2 mL樣品勻液，就加到2 mL雙料LST中；若要接種10 mL樣品勻液，就加到10 mL雙料LST中；若要接種100 mL樣品勻液，就加到100 mL雙料LST中，只要你能找到合適的產氣收集裝置。

     3.MPN 計數法初發酵試驗陽性結果描述由“觀察倒管內是否有氣泡產生”修改為“小倒管或產氣收集裝置內有氣泡產生，或輕輕振搖 LST肉湯管可見試管內有細密氣泡不斷上升者，判斷為產氣”，更加詳細明了。

     4. MPN計數法 的結果與報告增加“附錄C 確定最適的 3個連續稀釋度方法”，平板法的結果與報告增加“附錄D 規定了大腸菌群菌落數的計算、數值修約和結果報告的方式，并給出了相關示例。” 新增附錄讓實驗結果處理變得簡單。

培養基與試劑部分的變化提要：

重大變化之一：Fraser增菌肉湯FB1、FB2（貨號：GF1182）替代李氏增菌肉湯LB1、LB2。

重大變化之二：明確規定了OA李斯特氏菌顯色培養基（貨號：GF1003A/PB1003A）的配方。

重大變化之三：PALCAM培養基（貨號：GF1036）的選擇性添加劑配制方法進行勘誤。

重大變化之四：新增了無菌磷酸鹽緩沖液（貨號：DZ1011.225）和無菌生理鹽水（貨號：DZ1000.225），刪除緩沖蛋白胨水（BPW）。

     1. 參照 ISO 方法和經起草組驗證，將 定性檢驗和MPN法 中的選擇性增菌液體培養基由 LB1 和 LB2 修改為“Fraser增菌肉湯（FB1、FB2）”；選擇分離顯色培養基“李斯特氏菌顯色平板“修改為“OA李斯特氏菌顯色平板”并在 附錄A 培養基和試劑中增加了 OA李斯特氏菌顯色培養基配方。

     2.參照 ISO 等國際、國家標準，將平板計數規則“所有平板菌落數合計在  15CFU ～ 150CFU 之間的平板，計數典型菌落數。”修改為“所有平板典型和可疑菌落數合計在 15CFU ～ 150CFU 之間的平板，計數典型和可疑菌落數。”經驗證可提高結果的穩定性。

     1. 結合我國現行有效的與單增李斯特菌限量指標相關的標準將平板計數，“8.2 樣品的接種”將原來“每個稀釋度的樣品勻液分別吸取 1mL 以 0.3mL、0.3mL、0.4mL 的接種量分別接種 3塊李斯特氏菌顯色平板”修改為“每個稀釋度分別吸取 0.1mL 樣品勻液，接種1個 OA李斯特氏菌顯色培養基（或其他等效的李斯特氏菌顯色培養基）平板”，大大減少了顯色培養基的用量，又能滿足現行產品標準需要。同時繼續保留“0.3mL、0.3mL、0.4mL 涂布法”，滿足檢出限更低的需求和方法的延續性。

      2. 在“5.5 鑒定”中增加“如選擇生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統，可不經 5.4 初步鑒定，直接從 TSA-YE平板或羊血平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當的菌懸液，使用微生物生化鑒定試劑盒或微生物生化 鑒定系統進行鑒定。”結合使用生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統實際情況，優化鑒定流程，縮短檢驗時長。

     1. 在 8.2 樣品的接種中增加“8.2.3 從樣品稀釋至樣品接種完畢不得超過 45min。”避免操作時間過長影響計數結果。

     2. 在“5.2 分離”中增加顯色培養基菌落識別注意事項（避免假陰性和假陽性結果）：

注1：一些單核細胞增生李斯特氏菌在 OA李斯特氏菌顯色培養基上的菌落周圍的暈圈不明顯甚至沒有暈圈。還有一些單核細胞增生李斯特氏菌在 OA李斯特氏菌顯色培養基上的菌落周圍的暈圈出現得比較遲緩，有時需要 4d 以上才出現。
注2：伊氏李斯特氏菌在 OA李斯特氏菌顯色培養基上的菌落形態與單核細胞增生李斯特氏菌相似。

     1. 刪除了術語和定義；增加了檢驗原理，并注明“絕大多數大腸埃希氏菌具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性，但大腸埃希氏菌O157 等菌株沒有β-葡萄糖醛酸苷酶活性。另外，腸桿菌科內一些志賀氏菌、沙門氏菌等菌株也具有β-葡萄糖醛酸苷酶活性。”

     2. 本新標準 MPN法中新增“對貝類及產品采用每個稀釋度接種 5管 LST肉湯的方法。”并且新增相應“附錄C 貝類及產品中大腸埃希氏菌最可能數（MPN）檢索表”。

     3. MPN計數法 初發酵試驗陽性結果描述由“觀察倒管內是否有氣泡產生”修改為“小倒管或產氣收集裝置內有氣泡產生，或輕輕振搖 LST肉湯管可見試管內有細密氣泡不斷上升者，判斷為產氣”，更加詳細明了。