用煮沸法來做大腸桿菌質粒DNA的提取實驗
質粒DNA的提取是從事基因工程工作中的一項基本實驗技術,但提取方法有很多種,以下介紹一種Z常用的方法:堿裂解法:此方法適用于小量質粒DNA的提取,提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。
實驗材料:大腸桿菌細胞
試劑、試劑盒:溶菌酶
儀器、耗材:eppendorf管,衛生紙,STET溶液,水浴鍋,電泳儀,離心機,混勻儀。
實驗步驟:
1、將1.5 ml培養液倒入eppendorf管中,4 ℃下12000g離心30秒。
2、棄上清,將管倒置于衛生紙上幾分鐘,使液體流盡。
3、將菌體沉淀懸浮于120 ml STET溶液中, 渦旋混勻。
4、加入10 ml新配制的溶菌酶溶液(10 mg/ml), 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量離心機4 ℃下12000 g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細菌碎片。
8、取20 ml進行電泳檢查。
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