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諾坦普(Nanotemper) Tycho NT.6蛋白品質(zhì)分析儀

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諾坦普(Nanotemper) Tycho NT.6蛋白品質(zhì)分析儀

 

Tycho NT.6蛋白品質(zhì)分析儀.png

Tycho 可以在一次實(shí)驗(yàn)中告訴您蛋白品質(zhì)信息?蛋白是否存在、純度、濃度、結(jié)構(gòu)的完整性、批次間品質(zhì)的相似程度以及其功能。

Tycho S次實(shí)現(xiàn)了 3 分鐘內(nèi)檢測(cè)任意蛋白樣品的品質(zhì),僅需 10 μL 樣品,無(wú)需標(biāo)記,使您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和純化工作更加高效。

解決方案

直到完成了一個(gè)漫長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)但無(wú)結(jié)果,您才發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)出了問(wèn)題。隨后就需要對(duì)問(wèn)題進(jìn)行枯燥的、漫無(wú)邊際的排查。也許您在 SDS-PAGE 上只能找到一個(gè)彌散的條帶,或無(wú)法在 Western 上看到一個(gè)目的條帶,也許 ELISA 無(wú)結(jié)果,或在結(jié)合實(shí)驗(yàn)中看不到相互作用。Tycho NT.6蛋白品質(zhì)分析儀1.png

使用 Tycho,將新制備樣本的結(jié)構(gòu)完整性或折疊情況與高品質(zhì)的樣品進(jìn)行比較,以檢驗(yàn)它們的相似性。如果不同,您制備的可能是一個(gè)有污染物的低品質(zhì)的樣品?這表明需要純化或優(yōu)化您的純化流程。

確定樣品品質(zhì)的一部分工作是確認(rèn)蛋白是否存在,以及純化效率。這些信息將有效地幫助您計(jì)劃下一步實(shí)驗(yàn)。

通常,您會(huì)使用分光光度計(jì)檢查純度和濃度,然后通過(guò) SDS-PAGE 或 Western 確認(rèn)其一致性。而現(xiàn)在,我們有更高效便捷的選擇。

與傳統(tǒng)方法相比,Tycho 給出的結(jié)果有更豐富的內(nèi)涵。它不僅告訴您蛋白是否存在,以及蛋白pro?le 是否一致,而且可以給出未知蛋白的相對(duì)濃度信息。因此,在未來(lái)讓我們把那些既耗費(fèi)時(shí)間,又耗費(fèi)大量珍貴樣品的傳統(tǒng)方法放一邊吧。

如果您選擇儲(chǔ)存蛋白,您需要找到蛋白合適的緩沖液條件。當(dāng)然,這取決于是準(zhǔn)備長(zhǎng)期凍存還是在冰箱中短期保存。

如果您想要馬上使用蛋白,首先要問(wèn)問(wèn)自己,您的樣品所在緩沖液是否與下一步的實(shí)驗(yàn)條件兼容。如果答案是否定的,您必須要找出既能滿足實(shí)驗(yàn)需求,又能確保蛋白品質(zhì)(protein quality) 的緩沖液條件。Tycho NT.6蛋白品質(zhì)分析儀2.png

Tycho 可以幫助您確定樣品儲(chǔ)存或者 assay development 所需的緩沖液條件,保證蛋白的品質(zhì)。利用 Tycho,您可以快速篩選不同的緩沖液、添加劑、賦形劑以及儲(chǔ)存溫度、儲(chǔ)存時(shí)間,從而確定蛋白處于條件。因此, 通過(guò) Tycho,您可以節(jié)省大量時(shí)間,避免重復(fù)純化一批又一批蛋白。

真正的問(wèn)題可能出在蛋白功能上,一個(gè)經(jīng)常容易被忽視的蛋白品質(zhì)參數(shù)。傳統(tǒng)方法檢測(cè)兩個(gè)分子相互作用耗時(shí)較長(zhǎng),且實(shí)驗(yàn)體系不易建立,通常大家會(huì)直接跳過(guò)這一步。直至問(wèn)題出現(xiàn),我們才意識(shí)到功能測(cè)試的必要性。

Tycho 可以在 3 分鐘內(nèi)檢測(cè)蛋白的功能,告訴您目標(biāo)蛋白是否和其他分子相互作用。Tycho 通過(guò)非標(biāo)記的方法、用極少量的樣品來(lái)進(jìn)行檢測(cè),比傳統(tǒng)的方法更加簡(jiǎn)單。

系統(tǒng)升溫過(guò)程中(溫控范圍 35?95 ℃,升溫速率 30 ° C/min),檢測(cè)并記錄波長(zhǎng)為 350 nm  和 330 nm 時(shí)的蛋白內(nèi)部色氨酸和酪氨酸殘基的內(nèi)源熒光信號(hào)。這些熒光信號(hào)的變化可以表明蛋白折疊狀態(tài)的轉(zhuǎn)變。在轉(zhuǎn)變發(fā)生時(shí)的溫度被稱(chēng)為拐點(diǎn)溫度 (Ti),350 nm 與 330 nm 的比值被用來(lái)計(jì)算 Ti 值。Tycho NT.6蛋白品質(zhì)分析儀3.png

每一個(gè)蛋白去折疊的過(guò)程都是。在檢測(cè)過(guò)程中,Tycho 可記錄全部的熒光信號(hào),包括初始值以及在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的信號(hào)變化 (Δ ratio)。通過(guò)參考去折疊過(guò)程中的信號(hào)參數(shù),比較和驗(yàn)證不同批次間的蛋白品質(zhì)。

流程監(jiān)測(cè)

初始純化:檢測(cè)蛋白是否存在

  • 色譜純化:找出包含您目標(biāo)蛋白的組分, 并檢查其功能性

  • 純化蛋白:確認(rèn)批次間的相似度、純度、功能性以及濃度

  • 儲(chǔ)存樣品:選擇最適的儲(chǔ)存條件。凍融后與儲(chǔ)存前的數(shù)據(jù)對(duì)比,如相似度、純度、功能性和濃度等信息

    Tycho NT.6蛋白品質(zhì)分析儀4.png

  • 實(shí)驗(yàn)方法開(kāi)發(fā):檢測(cè)蛋白的濃度,并測(cè)試其是否功能性以及活性

    產(chǎn)品特點(diǎn)

  • 免標(biāo)記檢測(cè):無(wú)染料標(biāo)記,無(wú)需對(duì)您的樣品進(jìn)行任何修飾?天然條件下檢測(cè),從而得到更直接、更相關(guān)的蛋白品質(zhì)及蛋白功能的信息。

  • 儀器小巧方便:Tycho 小巧美觀,卻可以整合全部的蛋白品質(zhì)信息,為您節(jié)省大量的實(shí)驗(yàn)空間。

  • 任意蛋白類(lèi)型的檢測(cè):無(wú)需透析或樣品稀釋。可在寬廣的濃度范圍,及任意緩沖液中進(jìn)行蛋白品質(zhì)檢測(cè)。

  • 節(jié)省寶貴樣品:Tycho 僅需 10 μL 的樣品便可檢測(cè)您的蛋白品質(zhì),而且會(huì)節(jié)約您下游的一些實(shí)驗(yàn)參數(shù)的測(cè)定。

  • 3 分鐘內(nèi)得出結(jié)果:實(shí)現(xiàn)在 3 分鐘內(nèi)快速生成數(shù)據(jù),從而輕松決定下一步做什么,推動(dòng)實(shí)驗(yàn)快速進(jìn)行。

  • 體驗(yàn)直觀的用戶(hù)界面:在測(cè)試同時(shí)可編輯樣品名稱(chēng),記錄完整的實(shí)驗(yàn)信息。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),輕松便捷地導(dǎo)出原始數(shù)據(jù)、自動(dòng)分析結(jié)果及總結(jié)報(bào)告圖。

  • 可測(cè)任意類(lèi)型的樣品:抗體、激酶、多聚復(fù)合物、轉(zhuǎn)錄因子、膜蛋白、標(biāo)簽蛋白、點(diǎn)突變體、酶、病毒顆粒、功能性蛋白(單克隆 mAbs)等

樣品數(shù)量

6個(gè)

測(cè)量時(shí)間

3分鐘

樣品消耗量

10μL

樣品濃度范圍(標(biāo)準(zhǔn)IgG參照)

0.010 至 200 mg/m L 以上

濃度范圍(同一測(cè)試中)

1-500倍不同濃度(標(biāo)準(zhǔn)IgG參照)

測(cè)量參數(shù)

Inflection temperature (Ti)
Sample brightness
Aratio (between 95 ℃ and 35℃)
Initial ratio (350 nm/330 nm at 35℃)

Ti*值重復(fù)性(在70℃時(shí))

標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.15℃ 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于0.2%

ΔTi值顯著性標(biāo)準(zhǔn)

±0.3℃

溫控范圍

35 ℃ - 95℃

升溫速度

30℃/min

變性曲線斜率精度

±0.05℃/min

熒光檢測(cè)通道

330+/-5 nm 和350+/-5 nm

熒光源

內(nèi)源色氨酸和(或)酪氨酸

儀器尺寸

31 cm (長(zhǎng))×37cm (高)×18 cm (寬)

儀器重量

6.6 Kg

TychoTM NT.6 耗材


數(shù)量

樣品體積

樣品濃度范圍
(標(biāo)準(zhǔn)IgG參照)

TychoTM NT.6 毛細(xì)管

200 支

10 μL

0.010 至 200 mg/mL 以上


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