產品簡介

CelCulSF^TM Mesenchymal Stem Cell（MSC）Culture Medium（Serum-free）培養基是專為人類間充質干細胞（包括臍帶間充質、骨髓間充質、脂肪間充質、臍帶血間充質等干細胞）設計的一款標準化生產、無異種動物源、無血清的培養基。與傳統添加動物血清的培養基相比，間充質干細胞（MSC）無血清培養基能維持間充質干細胞的無分化生長， 保持細胞的形態特征和正常的染色體核型等，保證間充質干細胞的高增殖率以及分化潛能。

組分信息

成分說明

無血清培養基和添加物均無異種動物源成分、無抗生素、無酚紅，含谷氨酰胺。

儲存條件

間充質干細胞（MSC）基礎培養基（無酚紅），2~8℃，有效期18個月；

間充質干細胞（MSC）添加物，-20℃，有效期18個月。

使用說明

一、MSC完全培養基的配制

1. 間充質干細胞（MSC）添加物置于37℃水浴鍋中至完全融化后立即拿出，若出現少量絮狀物或渾濁為正常現象，不會影響細胞培養性能，建議離心去除絮狀物（3400 g，3 - 5 min），直接使用或分裝儲存于-20℃，避免反復凍融。
2. 將25 mL間充質干細胞（MSC）添加物加到500 mL間充質干細胞（MSC）基礎培養基（無酚紅）中，徹底混勻。

二、原代細胞培養（以臍帶來源為例）

1. 臍帶洗滌：無菌有齒鑷轉移臍帶至10 cm無菌培養皿中，用醫用碘伏消毒整根臍帶外表面，轉入新的平皿中，加入75%乙醇浸沒整根臍帶，消毒滅菌后，轉入新的平皿中，加入5 - 10 mL氯化 鈉注射液沖洗，重復2～3次，去除血漬。
2. 無菌組織剪將臍帶剪成約2～3 cm數段，加入5 - 10 mL氯化鈉注射液洗滌血凝塊，重復洗滌直至基本去除血漬，洗滌液較清澈。
3. 剔除血管：按血管螺旋走式剔除臍帶的兩條動脈，一條靜脈。
4. 分離華通氏膠：用有齒鑷將華通氏膠撕下，放入無菌平皿中，加入5 - 10 mL氯化鈉注射液，洗滌膠體。
5. 洗滌膠體：將獲得的膠體轉移至50 mL 離心管，加氯化鈉注射液20 - 30 mL,輕輕晃動，2000 rpm、5 min。
6. 膠體稱重：上清液棄去，稱重記錄。
7. 組織勻漿：膠體中加入2～3 mL培養基，用無菌組織剪，在離心管中將組織剪切成組織勻漿塊，2000 rpm、5 min離心，去除上清。
8. 根據膠體重量，加入適量完全培養基，定容，吹打均勻，按照每瓶0.5 g接種到培養瓶（T75瓶）中，每瓶8 - 10 mL培養基（T75瓶）培養。
9. 平置培養瓶使組織塊盡量均勻分布于整個底面，將培養瓶放置于二氧化碳恒溫恒濕培養箱。培養條件：37±0.5℃，CO₂體積分數為5±0.2% 。
10. 培養第7天，全量換液，合并收集組織塊，離心上清液棄掉。新鮮完全培養基重懸組織塊，均勻種瓶。
11. 細胞可見時間5 - 9天，細胞可收獲時間10 - 14天。
12. 3個以上組織塊附近細胞融合度達85%以上，細胞可收獲，倒出培養上清，使用生理鹽水清洗培養瓶底面1~2遍，使用0.05%胰酶或重組細胞消化液消化細胞，終止消化后，收集細胞懸液至離心管，細胞液過細胞篩網去除組織，450g，5 min離心，沉淀即為原代收獲細胞。

三、MSC傳代細胞培養

1. 取復蘇或傳代收獲的MSC，進行計數。
2. 用配制好的完全培養基重懸細胞，根據鋪瓶密度進行鋪瓶培養。

鋪瓶密度：P1 - P3代細胞鋪瓶密度4000 - 6000 個/cm²，P3 代以上傳代細胞鋪瓶密度6000 - 8000個/cm²。

鋪瓶體積：T25瓶，每瓶鋪瓶體積5 mL；T75瓶，每瓶鋪瓶體積13 mL；T175瓶，每瓶鋪瓶體積30 mL。

細胞鋪瓶后，晃勻后放置37℃，二氧化碳培養箱中培養。

3. 細胞培養時間72 h，觀察細胞融合度達85%以上，倒出培養上清，使用生理鹽水清洗培養瓶底面1~2遍，使用0.05%胰酶或重組細胞消化液消化細胞，終止消化后，收集細胞懸液至離心管，450 g，5 min離心，沉淀即為收獲細胞。

注意事項

1. 間充質干細胞（MSC）添加物在37℃水浴鍋復融，復融后直接使用或分裝儲存于-20℃，避免反復凍融。
2. 間充質干細胞（MSC）添加物復融后可能會出現少量絮狀物或渾濁為正常現象，不會影響細胞培養性能，建議離心去除絮狀物（3400g，3 - 5 min）。
3. 間充質干細胞（MSC）添加物可在-20°C至-40°C條件下進行長期儲存到有效期結束，一旦化凍，可在4°C最多放置7天，配制成的完全培養基可在4度條件下可穩定放置14天。
4. 本產品僅作科研用途。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20241016