H1人胚胎干細胞系

產品基本信息

規格：1×10⁵cells/管
活細胞運輸：收到細胞后，請立即放入培養箱中培養；
凍存細胞運輸：可暫存于-80℃冰箱或液氮長期儲存。

產品簡介

H1人胚胎干細胞系是國際上最通用胚胎干細胞系之一，該細胞是從人類早期胚胎內細胞團分離出來，

具有體外培養無限增殖、自我更新和多向分化的特性。可為細胞遺傳操作和分化研究提供豐富的實驗材料。

該產品采用埃澤思生物的人多能干細胞條件培養基（AC-1001000/AC-1001001）進行細胞培養與傳代。

本產品經檢測H1人胚胎干細胞系無細菌、真菌、霉菌、支原體污染，檢測為陰性。

本細胞系已通過STR鑒定；用Axygen的基因組抽提試劑盒提取DNA，采用21- STR擴增方案擴增，在

ABI 3730XL型遺傳分析儀上對STR位點和性別基因Amelogenin進行檢測。

產品組成

實驗材料

iPS 人誘導多能干細胞（Applied Cell?: Cat. no.AC-2001001）
H9 人胚胎干細胞系（Applied Cell?: Cat. no.AC-2001002 H9）
人多能干細胞培養基（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001000）
即用型基質膠（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001007）
人多能干細胞消化液（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001008）
ES/iPS 細胞凍存液（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001012）
磷酸緩沖鹽溶液(1×)(Applied Cell?: Cat. no.AC-1001037)

操作方法（以下步驟皆應在無菌條件下操作）

H1 人胚胎干細胞復蘇

實驗操作步驟：
1.1. 基 質 膠 包 被 培 養 板 ： 取 出 6 孔 板 /12 孔 板 ， 每 孔 內 加 入 1 mL/0.5 mL 即 用 型 基 質 膠（AC-1001007），

輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使基質膠完全覆蓋皿底，置于 37℃培養箱中孵育1h~2h，實驗前拿出并置于超凈工作臺/

生物安全柜中室溫下平衡 20min。如果暫時不用，可用Parafilm 封口后 2-8℃ 儲存，并于 1 周內使用。
注意：①一支凍存的干細胞的數量在 1×105cells/mL 左右，對應 6 孔板 1 孔；②即用型基質膠
對溫度敏感，即用即拿，用完后立即放回 4℃冰箱保存，且勿用手直接觸碰基質膠液面所及的瓶身，影響基質膠質量。
1.2. 先將 2~3mL 的干細胞培養基加入 15mL 離心管中備用。
1.3. 解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入 37℃溫水中，快速搖動，使其在 1~2min 內快速解凍；
注意：細胞從液氮中拿出的速度要快，盡量減少其暴露在室溫中的時間。
1.4. 離心：凍存管中的凍存液解凍后，將其逐滴加入含有干細胞培養基的 15mL 離心管中，將 15mL
離心管置于低速離心機中配比平衡后，1200rpm 離心 3min；
1.5. 重懸：離心后棄上清加 1mL 人多能干細胞培養基對干細胞沉淀進行吹吸混勻，吹吸 3~5 次左右。
1.6. 接種：吹吸均勻后，將已經平衡好的即用型基質膠棄掉，將吹打均勻的干細胞懸液加入到已經包被好的 6 孔板中，

并補全每孔 2mL 培養體系。
1.7. 培養：接種后的 6 孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細胞密度以及細胞團塊大小，呈4 個細胞以上的團塊較合格，水平十字輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使細胞均勻分布。并置于 37℃，5% CO2 的恒溫培養箱培養，第 2 天觀察細胞貼壁情況；
1.8. 換液：從復蘇的時間開始每 24h 換液一次。
注意：因培養基中活性成分只足夠維持一天，所以每 24h 應及時更換新鮮培養基。

H1 人胚胎干細胞傳代

實驗具體操作步驟：

2.1. 清洗：吸掉原有培養基，貼壁緩慢加入 1 mL PBS 緩沖液并輕輕晃動，然后沿培養皿邊緣吸去 PBS緩沖液；
2.2. 消化：在 6 孔板中加入 2mL/孔人多能干細胞消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿底，并置于 37℃培養箱中 2~5 min；
注意：消化時間依據干細胞生長密度，消化時間略有不同，根據經驗一般建議時間 2-5min。消化過程中可以拿到倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若在顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣以及克隆內部細胞間出現間隙，即可吸掉消化液終止消化。

2.3. 吹打：吸掉消化液后，加入 2mL 人多能干細胞培養基（AC-1001000），用移液槍扇形吹打培
養皿底，輕柔吹打 3~5 次，使皿底干細胞集落脫落，并將其并轉移到 15mL 離心管中；

注意：吹吸皿底細胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數在 3~5 次為宜，盡量避免形成
單細胞。如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正常現象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。
2.4. 離心：1200rpm 離心 3min；
2.5. 接種：棄上清，用干細胞培養基吹打細胞 5-10 次，吸掉包被培養板中的基質膠，并將細胞懸液
加入到培養板中，且補全每孔 2mL 的培養體系。
注意：吹打細胞要溫柔，并且吹打次數不要超過 10 次。
2.6. 換液：每 24h 換液一次。
注意：因培養基中活性成分只足夠維持一天，所以每 24h 應及時更換新鮮培養基。

H1 人胚胎干細胞凍存
實驗具體操作步驟：

3.1. 清洗：同 2.1；
3.2. 消化：同 2.2；
3.3. 吹打：同 2.3；
3.4. 離心：同 2.4；
3.5. 重懸：離心后棄上清，加入 2 mL ES/iPS 干細胞凍存液（AC- 1001012）對干細胞沉淀進行吹
吸混勻，吹吸 3~5 次后，將其加入到凍存管中；注意：凍存液即用即拿，及時放回 4℃冰箱。
3.6. 記錄：在凍存管上標記凍存細胞種類、時間、操作者及細胞批次。
3.7. -80℃冰箱凍存：凍存管置于-80℃冰箱過夜。
注意：凍存管放置于-80℃冰箱時，要將凍存管直立放置，切忌凍存管斜放或橫放。
3.8. 液氮凍存：24 小時后將-80℃冰箱中的細胞轉移至液氮中長期凍存。
產品圖片

質量控制