Hifair^® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA為模板進(jìn)行多重定量PCR反應(yīng)的試劑盒。在實(shí)驗(yàn)的過程中，逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR在同一反應(yīng)管中進(jìn)行，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作，降低了污染的風(fēng)險(xiǎn)。

本試劑盒利用耐熱Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase進(jìn)行定量擴(kuò)增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的MP Buffer，Enzymes Mix等，緩沖液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特異性PCR擴(kuò)增的因子和提升多重qPCR反應(yīng)擴(kuò)增效率的因子，能夠保證引物擴(kuò)增效率的同時(shí)，進(jìn)行多達(dá)四重的反應(yīng)。

產(chǎn)品組分

【注】a) 2×Hifair^® V MP Buffer為Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的簡(jiǎn)寫。

b) 不含Rox reference dye。如需，推薦使用貨號(hào)10200ES產(chǎn)品。

c) Hifair^® V Enzyme Mix主要包含有耐熱Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

適用機(jī)型

ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

運(yùn)輸與保存方式

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存，有效期1年。本品避免反復(fù)凍融。建議分裝保存。

注意事項(xiàng)
1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。
3. 本產(chǎn)品僅作科研用途！
 

反應(yīng)體系

【注】：使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。

a) 引物濃度：Primer Mix中包含多對(duì)引物，通常每條引物終濃度為0.4 μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM間進(jìn)行調(diào)整。

b) 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號(hào)的探針，每條探針的濃度可根據(jù)具體情況在50-300 nM間調(diào)整。

c) 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進(jìn)行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。

d) 反應(yīng)體系：推薦使用25 μL、30 μL或50 μL，以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。

e) 體系配制：請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，并使用無(wú)核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)增程序
 

【注】                                                                                             

a) 逆轉(zhuǎn)錄：42℃或者50℃均可，時(shí)間10-15 min。

b) 擴(kuò)增反應(yīng)：擴(kuò)增反應(yīng)溫度根據(jù)設(shè)計(jì)的引物Tm值進(jìn)行調(diào)整。CDC官方推薦的ORF1ab和N引物，退火溫度建議≥60℃。

c) 熒光信號(hào)采集：不同的qPCR檢測(cè)儀器所需的熒光信號(hào)采集時(shí)間不同，請(qǐng)根據(jù)最短時(shí)間限制進(jìn)行設(shè)置。
 

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新冠狀病毒檢測(cè)相關(guān)的試劑盒和組分，批間差小，無(wú)污染；
每一個(gè)酶都經(jīng)過工藝放大到百升，在十萬(wàn)級(jí)凈化車間生產(chǎn)和包裝，過30家客戶在使用我們的產(chǎn)品。

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