產品簡介

泛素化是通過三個酶促步驟實現的。在ATP依賴的過程中，泛素激活酶(E1)催化與泛素形成活性硫酯鍵，然后轉移到泛素載體蛋白的活性位點半胱氨酸(E2)。泛素級聯對特定底物蛋白的選擇性依賴于E2結合酶(細胞中包含的相對較少)和泛素-蛋白連接酶(E3s)之間的相互作用，迄今為止已經鑒定出600多種這種酶。E3s是一個大的，多樣化的蛋白質組，其特征是幾個確定的基序之一。這些包括HECT(與e6相關蛋白c端同源)，RING或U-box(沒有Zn2+結合配體的完整補充的修飾的RING基序)結構域。而HECT E3s在泛素化過程中具有直接的催化作用，RING和U-box E3s促進蛋白質泛素化。后兩種E3類型充當適配器類分子。它們使E2和底物足夠接近，從而促進底物的泛素化。雖然許多RING-type e3，如MDM2和c-Cbl，可以單獨發揮作用，但其他一些是作為更大的多蛋白復合體的組成部分，如后期促進復合體。綜上所述，這些多面的特性和相互作用使E3s能夠利用泛素-蛋白酶體系統，在真核生物的所有細胞中提供一種強大而具體的蛋白質清除機制。E3s的重要性突出體現在其調節的正常細胞過程的數量，以及與其功能喪失或靶向不當相關的疾病的數量.

產品性質

產品組分

反應緩沖液配方

參考陽性反應體系

反應條件

37℃孵育（30 min-120min，如果效果不明顯可增加反應時間12 h），建議使用PCR儀或金屬浴。

結果檢測 

1. 取樣品20 μL加入5 μL的5× SDS-PAGE Buffer加入1 μL（1M DTT新鮮配制），加熱樣品95℃ 5 min，隨后使用還原性（含DTT）上樣緩沖液進行SDS-PAGE電泳分析;
2. 選擇E3 Ubiquitin Ligase、泛素、Substrate抗體進行Western-blot分析。

儲存條件

-25~-15℃保存，建議第一次使用時分裝凍存。

注意事項

1. 避免反復凍融。

2. 本產品僅作科研用途。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20241203