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Bradford Protein Quantification Kit Bradford蛋白濃度測定試劑盒
- 品牌：翌圣生物
- 產地：
- 供應商報價：面議
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司
更新時間：2024-12-24 09:03:45 -
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入駐年限第1年
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產品描述
Bradford蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一。它是根據Bradford染液（考馬斯亮藍G-250染料）與蛋白結合，使染料的最大吸收峰從A456變為A595，且測定的吸光值與蛋白濃度成正比關系的原理設計的。本法通過吸光值，推算蛋白濃度，實現了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高，比Lowry法大約高四倍，最低蛋白檢測量可達1μg。測定速度快、簡單，僅需一種試劑即可，且不受大多數樣品中化學試劑的影響。
我司提供二種規格的Bradford蛋白濃度檢測試劑盒，比色皿法分別可做125次和625次。酶標法分別可做500次和2500次。
翌圣為您提供Western Blot實驗整體解決方案，相關產品選購請參考：WB實驗系列產品-選購指南
產品組分
編號
組分
產品編號/規格
20202ES76 (500T)
20202ES86 (2500T)
20202-A
Bradford蛋白染色液
125mL
5×125 mL
20202-B
蛋白標準品（BSA）
5×1mL（2mg/mL）
5×2mL（2mg/mL）
運輸與保存方法冰袋運輸。染色液4℃保存，蛋白標準品常溫或4℃保存，有效期一年。
注意事項1）Bradford染色液使用前，應充分混勻。同時，酶標儀需預熱20min。
2）Bradford染色液需恢復到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏度。另，使用前需顛倒幾次以充分混勻。
3）由于Bradford染液的顏色反應并不是同遞增的蛋白濃度呈線性關系，因此每次試驗都必須建立標準曲線。另外，為了得到更精確的結果，每個蛋白梯度和樣品均需做復孔。
4）Bradford法測定蛋白濃度對大多數化學物質的兼容性比較好，比如對還原劑DTT的兼容性高達5mM。但會受到略高濃度的去垢劑影響，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。對于含去垢劑的樣品，建議使用BCA增強型蛋白定量檢測試劑盒【貨號：20201ES76】。
5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
6）本產品僅作科研用途！
操作方法一、配制標準品
1. 配制BSA標準品體系
注：標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進行稀釋。
BSA標準品體系配制可參考表一。
表一BSA標準品體系配制（微孔板檢測，線性范圍100-1500μg/mL）
Vial
稀釋液體積(μL)
2mg/mL BSA體積(μL)
BSA終濃度(μg/mL)
A
0
100
2000
B
25
75
1500
C
50
50
1000
D
125
75
750
E
150
50
500
F
350
50
250
G
375
25
125
H
395
5
25
I
400
0
0=Blank
A. 標準比色皿檢測（線性范圍：100-1500μg/mL）
1. 各取20μL不同濃度標準品和待測樣品加入到反應管中；
2. 加入1mL Bradford染色液，混勻。室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時間不可超過1h；
3. 分光光度計上測定595nm處的吸光度，用裝滿水的比色皿對儀器校零。之后測定所有樣本濃度。
4. 根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD595nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
B. 標準微孔板檢測（線性范圍：100-1500μg/ml）
1. 各取5μL各濃度標準品和待測樣品加入到微孔板中；
2. 每孔加入250μL Bradford染色液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時間不可超過1h；
3. 酶標儀上測定595nm處的吸光度。或者其他575-615nm波長范圍內的吸光度，但是相對于595nm，吸光度會存在0-10%的損失。
4. 根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/mL；Y-最終的OD595nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
注：a）由于酶標板的光徑比比色皿短，經酶標板檢測得到的OD595nm會低于比色皿檢測所得，因此可能降低本法的檢測下限。要得到更高的OD595nm，可使用7-10μL標準品/待檢樣本，和250μL Bradford染色液來進行檢測。b）如果使用與酶標儀相關的曲線擬合算法（curve fitting algorithm），那么四參數或者最佳擬合曲線可能得到更為精確的結果，并不是單純的線性擬合。若是手動標記各點濃度，點-點曲線出來的結果精確于線性擬合。若對結果準確性的要求不是非常嚴格，可使用線性擬合分析數據。
附錄
表：Brandford蛋白濃度測定的兼容性名稱（鹽/緩沖液）
耐受濃度
ACES, pH 7.8
100mM
Ammonium sulfate
1M
Asparagine
10mM
Bicine, pH 8.4
100mM
Bis-Tris, pH 6.5
100mM
Borate (50mM), pH 8.5
undiluted
Calcium chloride in TBS, pH 7.2
10mM
Na-Carbonate/Na-Bicarbonate (0.2M), pH 9.4
undiluted
Cesium bicarbonate
100mM
CHES, pH 9.0
100mM
Na-Citrate (0.6M), Na-Carbonate (0.1M), pH 9.0
undiluted
Na-Citrate (0.6M), MOPS (0.1M), pH 7.5
undiluted
Cobalt chloride in TBS, pH 7.2
10mM
EPPS, pH 8.0
100mM
Ferric chloride in TBS, pH 7.2
10mM
Glycine
100mM
Guanidine•HCl
3.5M
HEPES, pH 7.5
100mM
Imidazole, pH 7.0
200mM
MES, pH 6.1
100mM
MES (0.1M), NaCl (0.9%), pH 4.7
undiluted
MOPS, pH 7.2
100mM
Nickel chloride in TBS, pH 7.2
10mM
PBS; Phosphate (0.1M), NaCl (0.15M), pH 7.2
undiluted
PIPES, pH 6.8
100mM
RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl,0.5% DOC,
1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0
1/10 dilution*
Sodium acetate, pH 4.8
180mM
Sodium azide
0.5%
Sodium bicarbonate
100mM
Sodium chloride
5.0M
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4
200mM
Sodium phosphate
100mM
Tricine, pH 8.0
100mM
Triethanolamine, pH 7.8
100mM
Tris
2M
TBS; Tris (25mM), NaCl (0.15M), pH 7.6
undiluted
Tris (25mM), Glycine (192mM), pH 8.0
undiluted
Tris (25mM), Glycine (192mM), SDS (0.1%), pH 8.3
1/2 dilution*
Zinc chloride in TBS, pH 7.2
10mM
名稱（變性劑）
耐受濃度
還原劑以及巰基試劑
耐受濃度
Brij™-35
0.125%
Dithiothreitol (DTT)
5mM
Brij-56, Brij-58
0.031%
Glucose
1M
CHAPS, CHAPSO
5.0%
Melibiose
100mM
Deoxycholic acid
0.05%
2-Mercaptoethanol
1M
Lubrol™ PX
0.125%
Potassium thiocyanate
3M
Octyl β-glucoside
0.5%
Thimerosal
0.01%
Nonidet P-40 (NP-40)
0.5%
Misc. Reagents & Solvents
耐受濃度
Octyl β-thioglucopyranoside
3.0%
Acetone
10%
SDS
0.125%
Acetonitrile
10%
Span™ 20
0.5%
Aprotinin
10mg/L
Triton™ X-100, X-114
0.125%
DMF, DMSO
10%
Triton X-305, X-405
0.5%
Ethanol
10%
Tween™-20
0.062%
Glycerol (Fresh)
10%
Tween-60
0.1%
Hydrochloric Acid
100mM
Tween-80
0.062%
Leupeptin
10mg/L
Zwittergent™ 3-14
0.025%
Methanol
10%
螯合劑
耐受濃度
Phenol Red
0.5mg/mL
EDTA
100mM
PMSF
1mM
EGTA
2mM
Sodium Hydroxide
100mM
Sodium citrate
200mM
Sucrose
10%
耐受濃度
TLCK
0.1mg/L
N-acetylglucosamine in PBS, pH 7.2
100mM
TPCK
0.1mg/L
Ascorbic acid
50mM
Urea
3M
Cysteine
10mM
o-Vanadate (sodium salt), in PBS, pH 7.2
1mM
Dithioerythritol (DTE)
1mM
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