產品簡介

Fura-2，細胞生物學常用的一種鈣熒光探針，能特異性地結合Ca²⁺（結合比例為1:1），同時可發出熒光，結合Ca²⁺后的最大激發波長從結合前的380 nm向340 nm（Ca²⁺飽和時）偏移，其發射熒光強度與結合Ca²⁺的濃度存在定量關系。一般用340 nm和380 nm波長激發Fura-2，通過使用與兩種激發對應的熒光強度比率來計算細胞內的鈣離子濃度，這種比率測量方法可以消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探針的滲漏，細胞厚度差異等一些誤差因素。Fura-2與Indo-1已成為目前使用最廣泛的比率測量的鈣熒光指示劑。目前適用于Fura 2實驗的設備有很多，但Fura-2特別適合于數字成像顯微鏡，使用該設備可更方便的調整激發波長，使探針結合鈣離子后在300 - 400 nm的激發波長范圍內掃描Fura-2的吸收偏移，在510 nm處檢測發射波長。

由于Fura-2是極性大的酸性化合物，無法進入細胞內，為此在其負性基團上結合乙酰氧甲酯，使其成為Fura-2/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負電荷，極大的提高了細胞滲透性。在細胞內，Fura-2/AM被酯酶水解成Fura-2后可與胞漿游離Ca²⁺可逆性結合。

組分信息

產品性質

儲存條件

室溫運輸。-20℃避光干燥保存，可保存1年。

使用說明

1. Fura-2/AM儲存液的配制

利用高質量無水DMSO溶解Fura-2/AM配制成2 - 5 mM的儲存液，該儲存液可分裝于-20℃避光干燥密封保存，最長可保存6個月，但是避免反復凍融，建議分裝保存。每次使用前需回溫至室溫。

2. Fura-2/AM工作液的配制

利用合適緩沖液（如HHBS）將Fura-2/AM稀釋成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有機陰離子轉運抑制劑probenecid（0.5 - 1 mM）。

注：① 對于大多數細胞系，建議最終濃度為4 - 5 μM的Fura-2/AM。細胞加載所需的指示劑的確切濃度必須根據經驗確定。

② Fura-2/AM工作液需現配現用，避免反復凍存。

③ Pluronic F-127 可以防止 Fura-2/AM在緩沖液中聚合并能幫助其進入細胞。

3. 取出預培養的細胞，除去培養基，使用緩沖液洗滌細胞3次。

注：如果使用含血清的培養基，血清中的酯酶會降低Fura-2/AM進入細胞的效果。另外含有酚紅的培養基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養基殘留。

4. 將 Fura-2/AM工作液加入細胞，加入量以覆蓋細胞為準。在37℃培養30 - 60 min。
5. 用緩沖液（如HHBS）洗滌細胞 3 次，以充分去除殘留的Fura-2/AM工作液。然后加入緩沖液覆蓋細胞。
6. 數字成像顯微鏡檢測細胞。

注：某些細胞具有自體熒光會影響結果分析，需使用未加載探針細胞做對照，在結果分析時在同一波長下扣除自熒光。

注意事項

1. 本產品僅作科研用途。

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3. 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethyl ester，AM）容易吸潮，從冰箱取出后，請確認在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底

5. 第一次使用時，建議母液現配現用。且溶解后的試劑盡可能在短時間內使用，以保證實驗效果。

6. 母液遇水極易分解，若單次不能用完，建議分裝保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并嚴格做到≤-20℃密封干燥保存。

7. 建議您在正式實驗前先摸索一下細胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養時間等，找到最佳實驗條件。

Ver.CN20241124