MolPure^® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit適用于生物制品樣本中殘留DNA檢測的前處理。采用獨特的磁珠和精心優化的緩沖體系，可最大限度的分離純化樣本中的微量宿主細胞殘留DNA。

該前處理試劑盒可與本公司的多種宿主細胞DNA殘留（qPCR法）檢測試劑盒配合使用，包括CHO宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒（Cat#41301ES）、HEK293宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒（Cat#41302ES）、Vero宿主細胞殘留DNA檢測試劑盒（Cat#41303ES）和E.coli殘留DNA檢測試劑盒（Cat#41304ES）。

 

產品組分

類別	組分編號	組分名稱	產品編號/規格
			18461ES25 （25 T）	18461ES60 （100 T）
Part I	18461-A	蛋白酶K（20 mg/mL）	0.5 mL/支×1支	1 mL/支×2支
Part Ⅱ	18461-B	磁珠懸浮液	0.5 mL/支×1支	1 mL/支×2支
	18461-C	裂解液	2.5 mL/瓶×1瓶	10 mL/瓶×1瓶
	18461-D	結合液	10 mL/瓶×1瓶	40 mL/瓶×1瓶
	18461-E	洗滌液A*	6 mL/瓶×1瓶 （需加9 mL乙醇）	24 mL/瓶×1瓶 （需加36 mL乙醇）
	18461-F	洗滌液B*	3 mL/瓶×1瓶 （需加12 mL乙醇）	12 mL/瓶×1瓶 （需加48 mL乙醇）
	18461-G	洗脫液	2.5 mL/瓶×1瓶	10 mL/瓶×1瓶
Part Ⅲ	18461-H	糖原	225 μL/支×1支	900 μL/支×1支
	18461-I	Poly A鉀鹽	150 μL/支×1支	600 μL/支×1支

 

運輸和保存方法

1. Part I組分冰袋運輸，4℃可保存1年，長期保存于-20℃。

2. Part II組分室溫運輸，室溫保存，有效期1年。

3. Part Ⅲ組分干冰運輸，-20℃保存1年。

4. 收到貨后，請檢查Part I、Part II和Part Ⅲ共3個組分是否齊全，并立即放入對應的保存溫度中儲存。

 

注意事項

1. 使用前請詳細閱讀使用說明書，嚴格按照使用說明書操作，樣本處理建議在超凈臺或生物安全柜中進行。

2. 注意觀察常溫保存溶液是否有析出或渾濁（尤其冬季室溫為低溫環境時），可37℃水浴至溶液澄清，避免影響使用效果。

3. 洗脫時可能存在磁珠殘留，吸取樣本時應盡量避免吸入磁珠。

4. 處理樣本及加樣時，勤換槍頭，避免交叉污染。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

6. 本產品僅作科研用途。

 

實驗前準備

1. 自備設備：漩渦振蕩器、水浴鍋或金屬浴、離心機、磁性分離架、杭州奧盛Auto-Pure32A自動化核酸提取儀或其他品牌全自動化核酸提取儀。

2. 自備耗材：10μL-1000μL不等的低吸附帶濾芯槍頭、1.5 mL低吸附離心管、PCR 8連管或96孔板及相應的管蓋或覆膜。

3. 自備試劑：無水乙醇（分析純）、1×PBS緩沖液（pH 7.4，無 Mg 和 Ca 離子）、超純水。

【注】：推薦您購買本公司的超純水（Cat#10116ES）。

4. 首次使用時，需在洗滌液A*和洗滌液B*瓶中加入標簽或說明書中注明體積的無水乙醇，充分混勻后使用，并做好標記。每次使用后將瓶蓋蓋緊，以保持瓶中的乙醇含量。

一、手工提取操作方法

1. 樣本處理

1.1 待測樣本為疫苗等本身含有較高的DNA含量的樣本，可用1×PBS（pH7.4，無Ca和Mg）對樣本進行適當比例稀釋后提取（對樣本進行稀釋是為了保證檢測的準確性，使樣本的檢測值在標準曲線線性范圍之內，通常可考慮進行100倍稀釋）。

1.2 待測樣本為干粉的，可用超純水將樣本稀釋成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。

1.3 待測樣本為復雜背景基質的，可根據需要進行加標回收實驗，以確定合適的樣本稀釋倍數。

2. 取100 μL樣本裝于1.5 mL離心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，渦旋混勻10 sec。

【注】：樣本蛋白濃度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量為10 μL；樣本蛋白濃度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量為20 μL。

3. 60℃孵育20 min。

4. 孵育完成后，加入400 μL結合液、9 μL糖原和6 μL Poly A鉀鹽渦旋混勻。  

5. 加入20 μL磁珠，渦旋混勻后，放置10 min，每隔3 min渦旋混勻10 sec。

【注】：磁珠使用前需渦旋混勻，保證磁珠徹底重懸。在一次性加樣4-5次后，建議再次混勻后再行加樣。

6. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸出液體。

7. 加入500 μL洗滌液A（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），振蕩或渦旋混勻，確保磁珠分散，離心管壁無聚集磁珠。

8. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸取液體。

9. 加入500 μL洗滌液B（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），振蕩或渦旋混勻，確保磁珠分散，離心管壁無聚集磁珠。

10. 短暫離心后，將離心管置于磁力架上靜置1-2 min，待磁珠完全吸附，小心吸取液體。

11. 為保證盡量吸出殘留液體，可將離心管快速離心10 sec后，置于磁力架上用10 μL移液器吸出殘留液體。

12. 打開管蓋，室溫放置3 min直至乙醇完全揮發。觀察到磁珠表面無反光或出現裂隙即表明乙醇已揮發完全。

13. 將離心管從磁力架上取下，加入50-100 μL 65℃預熱的洗脫液，振蕩混勻，短暫離心后，65℃孵育5 min，期間可振蕩混勻1次。

14. 短暫離心后，將離心管放置于磁力架上靜置2 min，待磁珠完全吸附，小心將DNA溶液轉移至新的離心管中，保存于-20℃，長期保存需放置于-80℃。

二、半自動化提取操作方法

配套自動化儀器使用，以杭州奧盛Auto-Pure32A自動化核酸提取儀為例（如要配套其他主流品牌自動化儀器使用，程序可向翌圣生物科技（上海）股份有限公司獲取）：

1. 樣本處理

1.1 待測樣本為疫苗等本身含有較高的DNA含量的樣本，可用1×PBS（pH7.4，無Ca和Mg）對樣本進行適當比例稀釋后提取（對樣本進行稀釋是為了保證檢測的準確性，使樣本的檢測值在標準曲線線性范圍之內，通常可考慮進行100倍稀釋）。

1.2 待測樣本為干粉的，可用超純水將樣本稀釋成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。

1.3 待測樣本為復雜背景基質的，可根據需要進行加標回收實驗，以確定合適的樣本稀釋倍數。

2. 取100 μL樣本裝于1.5 mL離心管中，加入100 μL裂解液和10 μL蛋白酶K，渦旋混勻10 sec。

【注】：樣本蛋白濃度0-100 mg/mL，蛋白酶K用量為10 μL；樣本蛋白濃度100-200 mg/mL，蛋白酶K用量為20 μL。

3. 60℃孵育20 min，即為預處理樣本，待用。

4. 按照下表向96孔深孔板中加入相應試劑（以杭州奧盛Auto-Pure32A核酸提取儀為例）：

板的名稱	位置	試劑名稱	用量/孔
樣品處理板	V1	預處理樣本	200 µL
		結合液	400 µL
		糖原	9 µL
		Poly A鉀鹽	6 µL
漂洗板	V2	洗滌液A*	500 µL
洗滌板/磁珠板	V3	磁珠懸浮液	20 µL
		洗滌液B*	500 µL
洗脫板	V6	洗脫液	50-100 µL

【注】：磁珠懸浮液使用前需在渦旋混勻儀上充分重懸或充分顛倒混勻，在一次性加樣4-5次后，建議再次混勻后再行加樣。

5. 按照提取儀的位置，正確安放上述96孔預裝板，并放置96深孔磁棒套。

6. 運行如下程序，程序結束后，將洗脫液轉移至新的離心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃長期保存。

奧盛Auto-Pure32A的提取儀器的提取程序

步驟	孔位	混合時間(min)	吸磁時間(sec)	等待時間(min)	容積(μL)	混合速度(1-10)	溫度(℃)	混合位置(0-100%)	混合幅度(1-100%)	吸磁位置(0-100%)	吸磁速度(1-10)
移磁珠	3	0.2	60	0	500	5	/	0	80	0	1
結合	1	15	90	0	600	5	/	0	80	0	1
清洗1	2	1	60	0	500	8	/	0	80	0	1
清洗2	3	1	60	4	500	8	/	0	80	0	1
洗脫	6	8	90	0	100	10	65	0	80	0	1
棄磁珠	3	0.2	0	0	500	5	/	0	80	0	1

HB220518