產品描述 

DiI, DiO, DiD, DiR是一系列親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構。這些環(huán)境敏感性熒光染料在進入細胞膜之前熒光非常弱，當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強。且具有消光系數高、極性依賴性、激發(fā)態(tài)壽命短等特點。一旦進入細胞膜后，可在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。不同的熒光染色（DiI:橙色熒光; DiO:綠色熒光; DiD:紅色熒光;DiR:深紅色熒光）為活細胞多標、流式分析提供了便利：1）DiO和DiI可分別用標準的FITC濾光片和TRITC濾光片檢測。2）DiD是DiI的衍生物，具有明顯往紅光遷移的激發(fā)和發(fā)射光譜，這一特性使其特別適合標記具顯著自熒光效應的細胞或組織。3）DiR具強效的近紅外光穿透細胞或組織，并在近紅外區(qū)具較低的自熒光水平，這些特性使其特適用于體內成像或示蹤實驗。

產品性質

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。產品-20 ºC干燥避光保存，有效期一年。

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3）DiR的發(fā)射波長肉眼不可見，因此需配備CCD鏡頭或其他的近紅外檢測儀器

4）本產品僅作科研用途！

 使用方法

1. 染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

【注】：a、未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融。

b、發(fā)現較難溶解時可以適當加熱，并用超聲處理以促進溶解。

（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

【注】工作液最終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。

2. 懸浮細胞染色

（1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

（2）37℃孵育細胞，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

（3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5 min。

（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。

（5）重復（3），（4）步驟兩次以上。

3. 貼壁細胞的染色

（1）將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

（3）在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

（4）37℃孵育細胞，不同的細胞最佳培養(yǎng)時間不同。可以20 min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。

（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基。

4. 檢測

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

表1 相關產品性質

HB220826