產(chǎn)品描述

UltraNuclease（全能核酸酶），又稱非限制性核酸內(nèi)切酶、廣譜核酸酶；是一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內(nèi)切酶，可在鏈內(nèi)任意核苷酸間進行切割，將核酸完全消化成2-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸，能夠在非常廣泛的條件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各種形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀，天然或變性）DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。

本品經(jīng)基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)中表達純化，純度≥ 99%，可用于科學(xué)研究中降低細胞上清和細胞裂解液的粘度，提高蛋白純化效率及功能研究，并且可以有效防止細胞治療和疫苗研究中人外周血單核細胞（PBMC）的結(jié)團。

本品以無菌液體酶的形式提供，儲存于緩沖液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，2 mM MgCl₂，20 mM NaCl，50% Glycerol）中，無色透明液體。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸和保存方法

干冰運輸。-15℃ ~ -25℃保存，有效期2年。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）本產(chǎn)品僅作科研用途！

推薦使用條件

在最佳條件下推薦的使用量及處理時間（37℃，2 mM Mg²⁺，pH 8.0）

使用方法

1、 樣本準(zhǔn)備

貼壁細胞：去除培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞，去除上清。

懸浮細胞：離心收集細胞，用PBS清洗細胞，6,000 rpm 離心10 min，收集沉淀。

大腸桿菌：離心收集菌體，用PBS清洗1次，8,000 rpm 離心5 min，收集沉淀。

2、樣品處理

   將收集到的細胞沉淀按照質(zhì)量（g）與體積（mL）比1：(10~20) 的比例進行裂解處理，也可通過在冰上或室溫通過機械或化學(xué)方法裂解細胞（1 g細胞約為10⁹個）。

3、酶的添加

1）添加適量MgCl₂將反應(yīng)體系中的Mg²⁺ 濃度調(diào)整在1-5 mM范圍內(nèi)，將pH調(diào)整成8-9。

2）按照250 Units消化1 g細胞沉淀的比例添加UltraNuclease，37℃孵育30min以上。也可以跟據(jù)上表中的推薦使用量自行選定添加方案，在一定范圍內(nèi)增加酶量，消化所需時間相應(yīng)減少。

【注】全能核酸酶的酶活受離子濃度、反應(yīng)溫度及pH等因素的影響，初次使用時建議摸索最適濃度。

4、上清獲取

以12,000 rpm的轉(zhuǎn)速離心30min獲得細胞裂解液上清，再進行后續(xù)相關(guān)實驗。

【注】若溶液為高鹽溶液，偏酸性或者偏堿性，含有較高濃度的去垢劑、變性劑，應(yīng)適當(dāng)增加酶的用量或延長孵育時間。

HB220729