在前幾期，我們重 點為大家介紹并推薦了適用于中藥配方顆粒檢測的各類安捷倫色譜柱，以便大家在日后的檢測工作中匹配使用。本期繼續帶來適用于王不留行和炒王不留行配方顆粒檢測的色譜柱推薦，跟上我們，精彩繼續！

Agilent Polaris 系列色譜柱通過極性改性，增強了鍵合相與水的兼容性，同時避免次級作用的影響。通過極性封端(Polaris C18-A,C8-A,C18-ether,C8-ether)或者極性包埋(Polaris Amide-C18)，Polaris 系列色譜柱可與 100% 水相兼容。由于極性修飾的作用，Polaris 系列色譜柱具有特殊的選擇性。

在國家標準中，王不留行和炒王不留行配方顆粒的檢測項目中，對特征譜圖和含量測定都采用 HPLC 方法。特征譜圖指定使用 ZORBAX Eclipse XDB C18 4.6x250mm, 5μm 色譜柱，含量測定也使用 HPLC 色譜柱。其中含量測定中系統適用性要求王不留行黃酮苷峰的理論板數按應不低于 3000。本文采用 ZORBAX Eclipse XDB C18 色譜柱對特特圖譜進行了重現，選用 Polaris C18-A 色譜柱用于含量測定。并采用 ZORBAX 的超高效色譜柱進行了 UHPLC 方法轉換，提高分析效率。

特征譜圖

1.1 王不留行實驗結果

圖 1. 王不留行配方顆粒標準對照譜圖與方法重現供試品特征譜圖(包括標準方法和 UHPLC 方法)的比較 （峰 3(S):王不留行黃酮苷）

色譜條件：

標準方法：

?流動相：A：乙腈；B：H2O（0.1%磷酸）

?梯度：0-35 min，95 %-80%B；35-60 min，80%B-40%B；后運行，10min

?流速：1ml/min

?柱溫：30 °C

?檢測波長：270 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率：2.5Hz

?進樣量：10 μL

UHPLC 方法：

?梯度：0-5 min，95 %-80%B；5-9 min，80%B-40%B；后運行，3min

?流速：0.6ml/min

?檢測波長：270 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率：20Hz

?進樣量：1 μL

?其余同上。

系統適用性結果見下表：

1.2 炒王不留行實驗結果

色譜條件：

同王不留行。

系統適用性結果見下表：

結果

1）使用 ZORBAX Eclipse XDB C18 柱，重現王不留行和炒王不留行標準方法，所有特征峰均能準確定位，且相對保留時間（RRT）完全符合標準要求。

2）UHPLC 方法中，王不留行環肽 B 的峰稍微提前，但通過標準對照定位，綜合研判，可符合標準要求。

3） UHPLC 方法可使分析時間縮短至原來的 15%。

含量測定

2.1 王不留行實驗結果

圖 2.供試品含量測定標準方法和 UHPLC 方法譜圖對照

色譜條件：

標準方法：

?流動相：A：乙腈；B：H2O（0.3%磷酸）

?梯度：0-10 min，65 %-65%B；10-20 min，65%B-60%B；20-35 min，60%B-60%B；后運行，10min

?流速：1ml/min

?柱溫：35 °C

?檢測波長：280 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率：2.5Hz

?進樣量：10 μL

UHPLC 方法：

?梯度：0-2.1 min，65 %-65%B；2.1-4.2 min，65%B-60%B，4.2-7.4 min，60%B-60%B；后運行，10min

?流速：0.4ml/min

?檢測波長：280 nm(4nm), Ref: off; 采樣頻率：20Hz

?進樣量：1 μL

 系統適用性結果見下表：

結果

1）選擇 Polaris C18-A 色譜柱，可以滿足含量測定系統適用性中理論板數要求(N>3000)。

2）由于存在溶劑效應，實驗中在自動進樣器和柱溫箱之間使用一段溶劑效應消除管線，可以進一步提高 HPLC 方法中的理論板數（接近于 4000），有利于提高分析方法的耐用性。

3） UHPLC 方法使用 Zorbax RRHD SB-Aq 柱，可以滿足系統適用性要求，并提高分析效率。

實驗結論 .

本實驗選用 ZORBAX Eclipse XDB C18 色譜柱對王不留行和炒王不留行配方顆粒特征譜圖進行重現，均符合標準要求。特征圖譜方法轉換成 UHPLC 方法后，有利于分析效率提升。含量測定中，使用 Polaris C18-A 有利于滿足系統適用性對理論板數的要求，必要時增加溶劑效應消除管線，進一步提高理論塔板數。

儀器系統及色譜柱推薦

1260 Infinity II 四元 HPLC 系統：四元泵 (G7111B)，自動進樣器 (G7129A)，柱溫箱 (G7116A)，VWD (G7114A)

1290 Infinity II 四元 UHPLC 系統：全能泵(G7104A)，自動進樣器（G7129B），柱溫箱(G7116B)，DAD(G7117A)

其它詳細操作可以參考 Agilent 配方顆粒圖譜集