- 2025-01-10 17:02:53反相色譜柱
- 反相色譜柱是基于物質(zhì)在固定相和流動相間分配系數(shù)的差異進(jìn)行分離的色譜柱。其固定相為非極性材料，流動相多為極性有機(jī)溶劑，適用于分離極性較弱的化合物。反相色譜柱具有分離度高、重現(xiàn)性好、適用性廣等特點，常用于藥物分析、環(huán)境監(jiān)測、食品檢驗等領(lǐng)域。通過調(diào)節(jié)流動相組成和pH值，可優(yōu)化分離效果。
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反相色譜柱資訊
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反相色譜柱文章
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- 本文介紹了ISCO RediSep?系列反相C18、C18Aq和C8色譜柱的使用、清潔及存儲方法。通過適當(dāng)?shù)念A(yù)處理、清洗和存儲，可以延長色譜柱的壽命并提高其一致性和可靠性。文章還提供了具體的操作步驟和注意事項，以確保色譜柱的最佳性能。
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反相色譜柱問答
- 2025-04-14 18:30:13反相液相色譜蛋白質(zhì)原理是什么？
- 反相液相色譜（Reverse Phase Liquid Chromatography, RPLC）是一種基于疏水相互作用的高效分離技術(shù)，廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)及多肽的分離、純化與分析。其核心原理在于固定相與流動相的極性差異，以及樣品分子與固定相之間的疏水分配效應(yīng)。以下將從分離機(jī)制、蛋白質(zhì)特異性行為、固定相與流動相選擇、應(yīng)用場景等角度展開說明。 反相色譜的固定相通常由疏水性材料（如C18、C8或C4鍵合硅膠）構(gòu)成，而流動相為極性溶劑（如水、甲醇或乙腈）。分離過程中，蛋白質(zhì)的疏水區(qū)域與固定相發(fā)生非共價結(jié)合，極性較強(qiáng)的分子優(yōu)先被流動相洗脫，疏水性更強(qiáng)的分子則因保留時間延長而實現(xiàn)分離。梯度洗脫是優(yōu)化分離效果的關(guān)鍵手段，通過逐步增加有機(jī)溶劑比例削弱疏水作用，從而按疏水性差異依次洗脫目標(biāo)分子。 蛋白質(zhì)在反相色譜中的行為具有特殊性。由于流動相中常添加三氟乙酸（TFA）等離子對試劑，蛋白質(zhì)可能發(fā)生部分去折疊，暴露出內(nèi)部疏水殘基，增強(qiáng)與固定相的相互作用。此外，低濃度TFA可誘導(dǎo)蛋白質(zhì)形成伸展構(gòu)象，導(dǎo)致其在死時間前洗脫；而高濃度TFA通過形成離子對使蛋白質(zhì)構(gòu)象緊湊（如“熔融球體”），延長保留時間。這種構(gòu)象敏感性使反相色譜不僅能分離蛋白質(zhì)，還可用于研究其構(gòu)象穩(wěn)定性與表面疏水性。 固定相的選擇需綜合考慮蛋白質(zhì)大小與疏水性。C18和C8適用于小分子肽段，而C4因較短的烷基鏈更適合大分子蛋白質(zhì)，避免過度保留。流動相中，乙腈因低黏度和高洗脫能力成為首選有機(jī)溶劑，TFA則通過抑制硅醇基電離減少峰拖尾。梯度優(yōu)化需平衡分辨率與時間成本，例如降低最大有機(jī)溶劑濃度可改善峰分離，但可能延長分析周期。 在應(yīng)用層面，反相色譜憑借高分辨率與質(zhì)譜兼容性，成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要工具。其典型場景包括：多肽藥物的純度分析、酶解產(chǎn)物的肽圖繪制、翻譯后修飾（如磷酸化、糖基化）的檢測，以及蛋白質(zhì)構(gòu)象變化的動態(tài)監(jiān)測。例如，與質(zhì)譜聯(lián)用時，反相色譜可分離復(fù)雜肽段混合物，通過質(zhì)譜鑒定實現(xiàn)蛋白質(zhì)序列的高通量解析。此外，其在治療性抗體表征中的應(yīng)用也日益增多，尤其在檢測聚集體與降解產(chǎn)物方面表現(xiàn)卓越。 操作參數(shù)的設(shè)置直接影響分離效能。流速需根據(jù)色譜柱內(nèi)徑與填料粒徑調(diào)整，通常內(nèi)徑4.6mm的C18柱推薦流速為1mL/min。壓力上限需控制在柱耐受范圍內(nèi)（通常≤6000psi），以避免固定相塌陷。檢測方法方面，紫外檢測（280nm）依賴蛋白質(zhì)中芳香族氨基酸的吸收，而質(zhì)譜聯(lián)用可提供分子量及結(jié)構(gòu)信息，靈敏度更高。 總之，反相液相色譜通過疏水相互作用與動態(tài)梯度洗脫，實現(xiàn)了蛋白質(zhì)的高效分離與分析。其獨特的構(gòu)象敏感性、靈活的固定相選擇及與質(zhì)譜的兼容性，使其在生物醫(yī)藥與基礎(chǔ)研究中不可或缺。未來，隨著新型固定相（如表面多孔顆粒）與微流控技術(shù)的發(fā)展，反相色譜在蛋白質(zhì)分析中的分辨率與通量將進(jìn)一步提升。
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- 2023-02-21 16:13:51為什么我們要關(guān)心色譜柱內(nèi)徑？
- 相信很多色譜分析員都知道，改變色譜柱內(nèi)徑將對許多變量產(chǎn)生直接影響，包括峰高、信噪比、平均柱效、樣品載量、對強(qiáng)注射溶劑的敏感性、壓力、分析物保留次、溶劑用量和/或液體廢物的產(chǎn)生等多方面問題。市面上的液相色譜柱的內(nèi)徑有4.6 毫米、3.0 毫米、2.1 毫米等等多種選擇，那么，為什么會有這么多內(nèi)徑規(guī)格呢，下面恒譜生帶您了解。一：內(nèi)徑對柱色譜有什么影響？ 在柱色譜法中，樣品物質(zhì)在流動相的幫助下穿過柱子。它們根據(jù)與固定相的相互作用進(jìn)行分離，從而產(chǎn)生不同的保留時間。換句話說，可以根據(jù)流動相和固定相之間相互作用的類型以及它們通過色譜柱所需的時間來分離和檢測分子。那么，柱徑如何符合方程式的呢？可以想象，更大的直徑使流動相更容易通過。相反，較窄的列意味著這樣做需要更長的時間。可以理解為這對敏感性有連鎖反應(yīng)，花在色譜柱上的時間越少意味著靈敏度越低，而時間越長則靈敏度越高。因此，較寬的直徑通常會導(dǎo)致較低的靈敏度，而較窄的直徑則與較高的靈敏度相關(guān)。其實樣本量也會有影響，較寬的色譜柱需要更大的樣品和更多的溶劑才能進(jìn)行分析，而窄的色譜柱可以使用較小的樣品和較少的溶劑作為流動相。 當(dāng)然，選擇色譜柱并不是只有內(nèi)徑這一種因素，色譜柱的長度和它們能夠承受的壓力也可能不同。從長度開始，這可以產(chǎn)生與直徑類似的效果。較短的色譜柱可縮短分析時間從而降低靈敏度。而較長的色譜柱會增加分析時間并改善結(jié)果。基于以上所述，很顯然長而窄的色譜柱會提供更加優(yōu)越的結(jié)果，因為它會增加分析時間、提高靈敏度并且不需要更大的樣品。但是，推動流動相通過色譜柱需要更大的壓力。色譜柱只能承受一定程度的壓力，而泵需要能夠提供足夠的壓力，因此在選擇時也需要考慮這一點。在泵的出口和進(jìn)樣閥之間可以安裝在線過濾器，是能夠用來過濾流動相中的雜質(zhì)和固體顆粒，保護(hù)液相系統(tǒng)的正常運行的一種過濾型色譜耗材。在液相色譜系統(tǒng)中，恒譜生在線過濾器可以很大程度上地減少泵、混合器和管路在流動相中輸送過程中所產(chǎn)生的堵塞、損壞儀器等情況出現(xiàn)。二：為什么要使用不同直徑的色譜柱？ 有兩個主要優(yōu)勢：其一是減少流動相消耗，其二是減少峰體積。如果將流速調(diào)整為恒定線速度，如HPLC柱徑改變時保留時間應(yīng)相同，因此樣品運行時間將保持不變。如果運行時間相同且流速降低，則將使用較少的流動相。峰體積（以體積表示的峰寬）隨著色譜柱橫截面積的減小或直徑變化的平方而下降。這轉(zhuǎn)化為成比例的更高的峰，假設(shè)相同質(zhì)量的樣品可以加載到色譜柱上，這可能是正確的，也可能不是正確的。因此，假設(shè)注入相同質(zhì)量的樣品，從 4.6 毫米內(nèi)徑的色譜柱換成 2.1 毫米的色譜柱應(yīng)該會將峰寬減少五倍，并將峰高增加相同的量。 當(dāng)柱直徑發(fā)生變化時，對流速進(jìn)行必要的改變以保持恒定的線速度是相當(dāng)簡單的。減小柱徑有助于節(jié)省溶劑和提高檢測限。但是對于較小直徑的色譜柱，可能會觀察到系統(tǒng)性能的下降。從故障排除的角度來看，很容易將系統(tǒng)性能不佳歸咎于色譜柱本身，而真正的罪魁禍?zhǔn)卓赡苁?LC 系統(tǒng)的柱外體積。對柱外效應(yīng)的相對不敏感是填充直徑 5 μm 顆粒的4.6 mm × 150mm 色譜分析柱可能在未來許多年內(nèi)仍然是常規(guī) LC 工作的主力色譜柱的原因之一。 今天恒譜生分享的知識先到這啦，希望對您的工作有所幫助！
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- 2023-01-10 13:36:08青出于藍(lán)，更勝一籌 | InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 極性保留色譜柱
- 你是否正面臨著大量化合物分析的挑戰(zhàn)？你是否想開發(fā)同時保留極性和非極性化合物的分離方法？你是否在尋找一款色譜柱，在分析物保留和通量之間平衡？全新 Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 色譜柱橫空出世，反相模式下使用 100% 水性流動相大幅提高強(qiáng)極性化合物的保留性能，兼顧通量和保留。Agilent InfinityLab Poroshell 120 系列色譜柱，多年來一直是追求效率的分析工作者的利器。除了推出了粒徑為 1.9 μm 和 4 μm 的填料，安捷倫還不斷增加了 Poroshell 120 固定相類型，進(jìn)一步拓展了應(yīng)用范圍。目前 Poroshell 120 系列用于小分子化合物分離的色譜固定相有 3 種粒徑、20 種固定相（包括本次新品 Poroshell 120 Aq-C18）。InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 色譜柱能夠：提高極性化合物的保留兼容 100% 水性流動相無需擔(dān)心固定相塌陷或去濕問題批次間高重現(xiàn)性可在所有分析型 HPLC 和 UHPLC 系統(tǒng)間擴(kuò)展如果您使用普通 C18 色譜柱，在分析方法開發(fā)/確認(rèn)階段遇到如下問題：化合物保留、分離和峰型有待改善待測組分極性跨度大高水或者純水條件下化合物保留時間漂移安捷倫 InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 將是您的理想之選！
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- 2022-03-08 11:51:31全新MaxPeak Premier SEC色譜柱隆重上市
- 全新MaxPeak Premier SEC色譜柱隆重上市，助力新型抗體藥物分析近日，沃特世公司隆重推出MaxPeak Premier SEC系列色譜柱。這款色譜柱專為ADC/雙抗分析設(shè)計，只需簡單的流動相，就能同時分離聚合物和片段。圖1. MaxPeak Premier SEC系列色譜柱MaxPeak Premier SEC采用專 利的Premier柱管，這是沃特世首次將該技術(shù)應(yīng)用于大分子分析的產(chǎn)品線。結(jié)合新型PEO鍵合相填料表面修飾，可大大減少次級作用，僅需較少的鹽即可得到對稱峰形。這一特點將使SEC的方法開發(fā)更簡單，即單一 流動相即可滿足不同樣品的分析需求，有利于建立一個高效的SEC分析平臺。圖2. 不同流動相中蛋白混合標(biāo)準(zhǔn)品分離色譜圖（A: MaxPeak Premier SEC色譜圖；B: 傳統(tǒng)SEC色譜圖）。針對ADC/雙抗的分子特性，MaxPeak Premier SEC對填料的孔徑進(jìn)行了優(yōu)化，孔徑分布更加合理，使ADC/雙抗的聚合物及片段分析都有了明顯的改善。圖3. MaxPeak Premier SEC分析ADC/雙抗的對比色譜圖。
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- 2021-07-26 08:50:46如何恢復(fù)hplc色譜柱性能？
- 大家都知道HPLC色譜柱的壽命是有限的，在使用過程中隨著時間的推移，其性能開始下降。你可以通過峰形和峰形之間的分離，柱背壓的不規(guī)律增加以及重影峰的出現(xiàn)來判斷HPLC色譜柱的性能出現(xiàn)了下降。色譜柱是昂貴的色譜耗材，平常使用完畢后需要保養(yǎng)。如果色譜柱真的發(fā)生了性能下降，有什么方法可以恢復(fù)呢? 首先，如果色譜柱由于過載或使用不兼容的流動相而結(jié)垢，是可以恢復(fù)的，但已經(jīng)損壞的色譜柱或已經(jīng)過使用壽命的色譜柱無法恢復(fù)，需要更換。 色譜柱還原程序如下，供大家參考： 反相柱 反相分離是大多數(shù)HPLC分離中使用的主要操作模式。填料主要由C18，C4，CN，NH2和苯基固定相組成。建議以水-乙腈-異丙醇-庚烷-異丙醇-乙腈-流動相的順序用10至20倍體積的溶劑洗脫 正相柱（氨基，二醇，硝基，氨基固定相） 用20倍體積的溶劑沖洗，按照庚烷-異丙醇-乙腈- 水-異丙醇-庚烷的順序。 GPC / GFC色譜柱 用5倍體 積且PH值為3的0.1%磷酸鹽緩沖液沖洗。如果使用了保留力強(qiáng)的蛋白質(zhì)，則使用從水到乙腈再到水的60分鐘梯度液沖洗。 色譜柱在使用前都要對其性能進(jìn)行考察，使用期間或放置一段時間后也要重新檢查，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。柱性能指標(biāo)包括在一定實驗條件下（樣品、流動相、流速、溫度）下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性，或分離度。進(jìn)行柱效比較時，還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是zui佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。 恒譜生色譜柱柱管由不銹鋼制成，不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光，減小管壁效應(yīng)，提高柱效，柱中填充鍵合硅膠或聚合物填料。色譜柱基于高純硅膠，采用獨特鍵合技術(shù)，具有優(yōu)異的峰形，靈敏性好。基質(zhì)金屬含量低，對所有類型的分析物均表現(xiàn)完好峰形。機(jī)械強(qiáng)度高，穩(wěn)定性好，質(zhì)控嚴(yán)格，確保色譜柱性能和色譜柱的使用壽命。有多種尺寸規(guī)格可供選擇以適應(yīng)色譜工作者及其使用的不同需求。我們有專業(yè)的技術(shù)工程師團(tuán)隊為您的需求提供解決方案，歡迎前來咨詢了解！
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