在本應用中使用了標準帶蓋保護罩的PIPETMAX（圖2），裝配單個移液頭及一個用于96孔板的標準托盤。使用TRILUTION? micro v3.0 軟件運行方法程序。

圖2 Gilson桌面型液樣工作站PIPETMAX? 

本應用使用了一個4x1200的移液頭。較大容量的吸嘴可以更有效地將稀釋液分配至目標管中，同時也能夠將樣品管中的血漿準確地按所需的體積轉移。 

4×1200移液頭使用Gilson PIPETMAN? DIAMOND D1200吸嘴（如有需要，也可以使用DF1200ST 無菌過濾吸嘴）。在該配置中，吸嘴的間距為18 毫米，非常適合用于血漿檢測的典型樣品管。例如，典型的真空采血管外徑為16毫米。

8 道移液頭吸嘴的間距為9毫米，過于窄小，因此上述配置相比使用8道移液頭更為高效。 

由于本應用不需要第二個移液頭，因此PIPETMAX移液頭支架的左側安裝了一個“空白”頭。

本應用使用了PIPETMAX標準托盤（托盤布局參見圖3），該托盤比適用于384孔板的托盤更為經濟。PIPETMAX 托盤有九個SBS標準板位，其中一個位置專用于廢棄吸嘴盒的放置；另一個位置放置了D1200吸嘴，即一盒96個吸嘴；第三個位置，放置了一個含稀釋液的6道儲液槽；Z后六個位置由樣品管和目標管占用（各占三個板位）。 

為適應所需的特殊工作流程，我們設計了兩種定制管架。一種定制管架用于放置采血管(BD Microtainer? MAP microtubes)，單個管架可容納24支采血管。第二種定制管架用于放置目標管(screw cap cryovials)，單個管架也可容納24支采血管。樣品管和目標管比例為1:1，可確保兩者無誤差排布。 

托盤上剩下的六個位置，可以用于樣品管架和目標管架的放置，每種各三個。在PIPETMAX上，這相當于完整的兩行，因此我們將三個樣品管管架放置在托盤的中間行，三個目標管管架放置在托盤的Z外面一行。由于每個管架可容納24支管，這意味著每次運行可處理總共72個樣品。

PIPETMAX 使用Gilson TRILUTION micro  v3.0  進行控制，運行的程序是使用Gilson  Protocol   Builder   v2.1 編寫。

為了使移液參數的優化盡可能簡便，運行程序在編寫時即引入了多個變量。在TRILUTION micro軟件運行時就可以調整這些變量的設置，而無需每次都編寫新的程序。這有助于程序的快速優化，允許用戶在實驗室中“動態”調整參數，無需編程操作。

圖4展示了在程序編寫過程中設置的變量，該程序包括稀釋和混合步驟，以及從樣品管中轉移上層血漿的步驟。在這里我們可以看到，吸液、排液和排空的流速可以進行調整，樣品數也可以進行調整。在混合步驟中，混合次數和混合時吸取的體積也可以作為變量進行調整。

圖4 變量的優化

使用 PIPETMAX，可以運行多種程序，這些程序可以包括完整的工作流程，也可以將工作流程中的一部分保存為單獨的程序進行使用。本篇應用中的完整移液程序，第一步是從儲液槽中吸取1260μL的稀釋液，并轉移到指定的凍存管中。這一步使用了Protocol Builder軟件中的“Transfer”，“Deliver from Pool”移液命令。在這一步驟中，參數設置了使用同一吸嘴吸取和轉移液體，直到該步結束時更換吸嘴。盡管操作體積超過了該移液頭/吸嘴組合的Z大容量， PIPETMAX 會自動將該體積均分，分兩步完成了操作。

在將稀釋液轉移至凍存管內后，第二個步驟是從每個樣品中移取 140μL 上清液至凍存管內。這個步驟也是一個移液命令，但用了“stamp transfer”命令，并設置了參數，強制 PIPETMAX在樣品之間更換吸嘴，以避免樣品之間的交叉污染。在移液命令設置的Z后，選擇了“mix”選項, PIPETMAX 完成樣品轉移步驟后，將立即使用相同的吸嘴將樣品稀釋液混合。除了將樣品和稀釋液混合之外，這一步還確保了在樣品排出后，吸嘴上殘留的任何液滴都被沖洗出來并進入凍存管中，從而提高了移液的精準性。 

從血液樣品中移取血漿的困難之一是樣品不一致。血液樣品的成分會因不同個體而有差異。如果患者貧血，那么紅細胞的含量相對于樣品體積就會更低。其他基于患者的差異可能來自患者的健康狀況，如水合水平、健康狀況、性別、年齡、Z近攝入的藥物或酒精，以及接觸的毒素或病毒。 

除了樣品組成的可變性外，實驗室收到的樣品體積也可能存在差異。在采集血液樣品時，通常使用真空管（vacutainer tube），該過程涉及使用真空將血液從體內抽入接收管中。真空抽吸獲得的樣品體積通常會存在一定差異。因此，在樣品組成的可變性之外，還可能存在一定程度的體積差異。 

這種可變性可能導致一些樣品不適合由 PIPETMAX 進行自動血漿采樣。作為一種經濟的解決方案，PIPETMAX 通過程序設定從樣品管中定義的高度開始吸取血漿。這意味著所有樣品管中至少需要有X體積的總樣品，以便在編程高度有血漿可以吸取到PIPETMAX的吸嘴中。一旦抽吸開始，PIPETMAX會通過軟件標準自帶算法控制，使吸嘴跟隨液位下降。在這種情況下，X的數值將根據收到的樣品按照實驗室的需要來確定。

需要考慮差異性的另一部分是在吸取所需體積時，起始點和紅細胞層之間是否有足夠的血漿。可以通過基于紅細胞需要低于一個可定義為Y的體積來更好地考慮這一點。

總的來說，如果紅細胞的體積小于體積 Y，且總樣品體積大于體積 X，則該樣品適合使用 PIPETMAX進行移液（見圖6）。由于血液樣品是放置在相同的采血管中的，因此可以合理地根據管內的高度估算這些體積，而無需測量體積。可以通過眼睛估算管內的高度，僅需配合定制管架來輔助就能可視化判斷。

為了Z佳優化工作流程，離心分離紅細胞和血漿后，在取出樣品管時應當進行適當樣品的篩選。任何被認為不適合的樣品都需要單獨考慮。有些樣品可能紅細胞含量較高，總體積較低，這可能導致樣品中沒有足夠的血漿來獲得所需的體積。在這種情況下，沒有任何移液方法能解決問題，必須使用較小的樣品體積進行工作，或者提出需要更多的樣品；有些樣品管則可能含有過多的樣品，導致血漿充足但紅細胞體積過大，超出可接受范圍。這些可以篩選出來并手動處理，或者如果這類樣品足夠多，可以在PIPETMAX 上運行另一個使用不同吸取起始位置的替代程序。