ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器 — 亞硝胺雜質的常規檢測

來源：沃特世科技（上海）有限公司(Waters) 分類：應用方案

2024-07-18 17:15:12 92閱讀次數

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近年來，藥物中具有基因毒性的亞硝胺雜質的測定一直是全球藥品監管機構的關注重點。亞硝酸鹽被認為是最容易導致亞硝胺雜質形成的物質。因此，在藥物輔料中提前對亞硝酸鹽成分進行檢測非常有必要。

現有的基于LC-MS儀器的檢測方案，可以基本做到精確檢測亞硝酸鹽含量。但是為進行藥物質量控制，需要開發一種操作簡單，同時結果可靠、可以勝任高通量檢測且成本相對較低的檢測方案。

為此，運用ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器開展研究，結果表明，ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器：

簡單易用，性能穩定
適用于需要進行高通量常規檢測的應用場景，例如藥物輔料中的亞硝酸鹽含量檢測。
穩定、宕機時間短
成功在超過676小時的工作時長內分析了約6,000份樣本，其中只有兩小時的非工作時間段。
結果可靠、耐用性好
在給定的樣品批次中，對于任意QC水平，%RSD沒有超過9.8%。
優異的量化精確性
成功測定出玉米淀粉輔料中0.14 μg/g的亞硝酸鹽含量。
分析結果直觀
搭載Empower色譜數據系統(CDS)，可一鍵生成完整報告。

由此可見，基于ACQUITY Arc UHPLC和ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器的6分鐘檢測方案是一個高效、經濟的量化藥物輔料中的亞硝酸鹽含量的分析方法。

工作流程

以山梨醇、一水乳糖、玉米淀粉、麥芽糊精和碳酸鈣為典型藥物輔料，使用ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器，開展了為期29天的長期檢測。所有試劑均加入2,3-diaminonaphthalene(DAN)進行處理，使亞硝酸根離子與DAN反應生成1H-Naphtho(2,3-d)triazole(NAT)，繼而進行質譜分析，以NAT的濃度來確定亞硝酸根的濃度。

圖1.采用Jire? & Dou?a, 2022的樣本處理方案。

將亞硝酸鹽標準溶液(1 μg/mL)制成不同濃度的加標樣本來確定基準，并以過程空白樣本確定樣本制備過程中引入的亞硝酸鹽含量。隨后進行為期29天的多組樣本反復測試。

實驗結果

ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器在長期工作中具有出色的可靠性和耐用性。

在Empower中繪制整個分析過程中預定義進樣序列的每個重復樣本(n=32)的校準曲線，觀察到每個進樣序列的校準曲線都是線性的(1/X加權)，R²均大于0.99。圖3顯示的是某一批次樣品的第一和最后一次校準圖的比較，這兩次校準之間相隔了近150小時的分析時間。在該案例中，任何給定數據點的相應殘差值都不超過3.7%。

圖2.亞硝酸鹽基準樣本與過程空白樣本絕對峰面積。

圖3.在開始和結束對一批樣本的分析時，校準標準樣本亞硝酸鹽(以 NAT 計)在 0.5-12.5 ng/mL濃度范圍內的校準響應。

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最后一批樣本的分析時間長達190小時，最能體現該方法隨時間變化的穩定性。我們通過比較加標藥物輔料樣本的峰面積和擁有與之相等亞硝酸鹽濃度的對照樣本的峰面積來評估回收率。該批樣本回收率見圖4，范圍為70-130%，基本全部在可接受的范圍內。所有樣本和加標樣本的總平均回收率為94%。

圖4.最后一批樣本中所有加標藥物輔料樣本中亞硝酸鹽的回收率(%)。

通過圖像可直觀看到只有玉米淀粉輔料樣本的峰面積顯著高于基準峰面積，由此將玉米淀粉輔料樣本篩查出來，確定為進一步檢測的對象，節約時間與成本。

圖5.在同一組樣本中，過程空白樣本與未加標的各樣本的SIR色譜圖。

本檢測方案中對于檢測精度的限制因素并不是質譜檢測器靈敏程度，而是過程空白樣本中的亞硝酸根離子濃度。這一點在圖7顯示的信噪比中有所體現。降低過程空白樣本受亞硝酸根離子污染程度會有助于進一步降低LOD，而ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器的靈敏度遠不止于本實驗中應用到的程度。

圖6.未加標玉米淀粉輔料樣本中亞硝酸鹽含量持續超過190小時的檢測結果，達到報告閾值。

圖7.未加標一水乳糖輔料樣本中亞硝酸鹽含量持續超過190小時的檢測結果。

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使用Empower CDS匯報功能可獲得同一批次樣本中亞硝酸鹽濃度，助力您做出快速、全面的決策，并確保實驗室數據的合規性。

圖8.使用Empower CDS生成的玉米淀粉輔料樣本中亞硝酸鹽含量的報告示例。

在為期29天的實驗中，該儀器檢測了5,792份試劑，其中1,920份是藥物輔料樣本。在676小時的樣本分析過程中，該設備只需要兩小時的維護時間，其中還包含20分鐘用于排風與清潔。

圖9.為期29天的實驗過程中累積測試的樣本數及維護情況。

在給定的樣品批次中，對于任意QC濃度，%RSD均沒有超過9.8%。在為期29天的分析過程中，亞硝酸鹽基準樣本絕對峰面積的%RSD不超過14.7%；對任意加標水平和所有試劑種類，加標樣本分析結果的%RSD始終小于20%。

圖10.對QC成分(咖啡因和對乙酰氨基酚)連續520小時分析所得的絕對峰面積。

表1.耐用性研究過程中總進樣次數和其中藥物輔料樣本的數量，加標基準樣本絕對峰面積的%RSD(任何給定的加標水平均為 n≥42)。

圖11.添加了0.2, 2.0, 5.0 μg/g亞硝酸鹽的碳酸鈣樣本的平均%RSDs。

圖12.為期29天的分析過程中，所有加標水平所有種類樣本的%RSD。

后記

亞硝胺的檢測始終是制藥行業中舉足輕重的必備環節，而其中的成分分析工作離不開先進的質譜儀。新發布的ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器簡便易用且十分穩定，將單四極桿質譜檢測器的性能提升至了全新水平。作為光學檢測的輔助儀器，ACQUITY QDa Ⅱ質譜檢測器可與您的色譜工作流程搭配使用，大幅降低非預期組分或共洗脫的風險，且通過單一工作流程就能夠可靠地確認微量樣品成分，有助于您獲得穩定、可靠且信息豐富的質譜數據。