疾病診斷與檢測

疾病治療

藥物遞送

上游生產(chǎn)

上游生產(chǎn)主要用于外泌體制造的細胞系的培養(yǎng)和擴增。選擇特定的細胞系進行傳代培養(yǎng)和擴增，以產(chǎn)生大量用于外泌體生產(chǎn)的細胞。通常，規(guī)模化擴培可以使用生物反應器進行分批補料培養(yǎng)，細胞培養(yǎng)時采用無血清培養(yǎng)基，以減少污染并有助于外泌體純化。

外泌體分離和純化

當前外泌體的分離方法主要包括差速離心法、TFF切向流過濾法、密度梯度離心、空間排阻色譜法（SEC）、聚合物沉淀和復合層析等方法。為了提高外泌體的濃度和質(zhì)量，超速離心、微濾法、空間排阻色譜（SEC）法和免疫親和等技術多用于外泌體純化。其中，TFF切向流過濾法和復合層析法是目前可供后續(xù)放大生產(chǎn)及穩(wěn)定重復的較好工藝路線。

TFF切向流過濾法：

1. 處理過程：照順序?qū)⒅锌绽w維安裝在切向流系統(tǒng)上，進端流速：100～130LMH，TMP：2～5 psi，剪切力：2000S^-1～6000S^-1。

在濃縮10～20倍后料液濾完后，開始換液，使用緩沖液換液，換液體積為濃縮后體積的6～8倍，之后收集濃縮系統(tǒng)所有液體至干凈的離心管或者儲液瓶內(nèi)，此為初始濃縮液。頂洗：關閉透過端，向濃縮系統(tǒng)中加入與初始濃縮液等量的緩沖液，開始沖洗濃縮系統(tǒng)，沖洗2min。在將這部分沖洗液加入初始濃縮液中，混勻，記錄濃縮液終體積或重量。

2. 英賽斯設備優(yōu)勢：AutoTFF配備先進的數(shù)據(jù)采集控制系統(tǒng)，能夠?qū)崿F(xiàn)與泵組模塊、天平模塊的數(shù)據(jù)交互，實時監(jiān)控過濾過程中的各項參數(shù)；提供多種自動化的方法，如濃縮模塊、透析模塊等，可根據(jù)需求靈活選擇，降低了人工干預的頻率和操作難度；自動化和智能化的特點確保了過濾過程的穩(wěn)定性和可靠性。

復合層析

1. 處理過程：上樣，將上一步濃縮產(chǎn)物接入層析系統(tǒng)，設置流速，0.2-0.5 CV/mL，開始上樣，觀察紫外吸收，待紫外吸收值為0~50 mAu時，開始收集流穿。平衡，樣品上完后，使用緩沖液開始平衡層析柱，直至紫外吸收值為0~50 mAu，停止停止收樣，如果紫外吸收在下降時出現(xiàn)拖尾，可以提前結束收樣。

2. 設備優(yōu)勢：可以設置固定的方法，確保重現(xiàn)性和解放人力。自動化的系統(tǒng)。可以實時記錄各項參數(shù)，確保數(shù)據(jù)完整性。

外泌體分析

為了清楚了解外泌體的質(zhì)量、大小、形態(tài)、特點，還需要對外泌體進行進一步分析研究。在外泌體表征中，通常會使用FACS流式細胞（FACS）多色分析、凝膠電泳W(wǎng)estern blot（WB）、ELISA等標記分析和組織學分析。外泌體質(zhì)量大小、形態(tài)分析主要使用的實驗設備包括納米粒度儀、透射電子顯微鏡（TEM）、納米粒子跟蹤分析儀（NTA）等。

凍干外泌體

雖然實驗室中常規(guī)的外泌體存儲條件為4℃、-20℃、-80℃，但外泌體存儲在-80℃將不利于其運輸及應用。采用外泌體凍干技術不僅可以在室溫條件下穩(wěn)定保存，還可以改善藥物遞送載體脂質(zhì)體的長期穩(wěn)定性。