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【空間蛋白組學】2024年度技術(shù)詳解

來源:賽默飛世爾科技生命科學產(chǎn)品      分類:應(yīng)用方案 2025-01-02 17:45:11 32閱讀次數(shù)
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空間組學是什么?可以用來研究什么科學問題?


空間組學是一個快速發(fā)展的領(lǐng)域,它將空間信息與組學數(shù)據(jù)(如基因組學、轉(zhuǎn)錄組學、蛋白組學和代謝組學)相結(jié)合,以全面了解組織中空間背景下的分子特征。

這種方法解決了傳統(tǒng)組學方法難以獲得空間信息的局限性,提供了對細胞微環(huán)境相互作用的更深入了解。

由于空間組學能夠?qū)⒖臻g信息與組學數(shù)據(jù)相結(jié)合,它可以解決傳統(tǒng)方法無法解決的幾個科學問題。代表性問題包括(上下滑動查看全部):

細胞微環(huán)境中的相互作用

- 不同類型的細胞如何在其原生組織環(huán)境中相互作用?

- 細胞之間的空間關(guān)系是什么,這些關(guān)系如何影響細胞行為和功能?

腫瘤異質(zhì)性

- 腫瘤內(nèi)異質(zhì)性在空間上是如何組織的?

- 腫瘤內(nèi)的不同克隆如何隨著時間的推移而相互作用和演化?

疾病進展

- 疾病進展在分子水平上的空間模式是什么?

- 分子標記的空間分布如何與疾病的階段相關(guān)?

藥物反應(yīng)和耐藥性

- 組織內(nèi)不同空間環(huán)境中的細胞如何對治療方案作出反應(yīng)?

- 哪些基因表達或蛋白水平的空間模式與耐藥性有關(guān)?

組織結(jié)構(gòu)和功能

- 特定基因表達和蛋白功能與組織的解剖學特征的關(guān)系是什么?

- 組織內(nèi)分子活動的空間梯度是什么?它們?nèi)绾斡绊懻w組織功能?

發(fā)育生物學

- 基因表達的空間模式如何指導不同組織類型和結(jié)構(gòu)的發(fā)育?

- 發(fā)育組織內(nèi)細胞分化和譜系追蹤的空間軌跡是什么?

免疫微環(huán)境

- 免疫細胞在組織內(nèi)的空間分布,尤其是在感染或癌癥中?

- 免疫細胞的空間排列如何影響其功能和與其他細胞的相互作用?

神經(jīng)和腦映射

- 不同神經(jīng)元群體在大腦中的空間組織方式?

- 與各種腦功能和病理狀態(tài)相關(guān)的基因表達的空間模式是什么?

與傳統(tǒng)的批量或單細胞測序方法相比,通過保留分子數(shù)據(jù)的空間背景,空間組學可以從空間維度更全面地了解三維的生物過程。

空間組學方法分類


空間組學采用多種方法將空間信息與各種組學數(shù)據(jù)類型整合在一起。這些方法包括(上下滑動查看全部):

空間轉(zhuǎn)錄組學

- 原位雜交 (ISH) :RNA ISH(例如 viewRNA)和熒光原位雜交 (FISH) 等技術(shù)可檢測組織切片內(nèi)的特定 RNA 分子。

-  空間分辨轉(zhuǎn)錄組學 :可檢測組織切片中的基因表達空間信息。

空間蛋白組學

-  免疫組織化學 (IHC) :使用抗體檢測組織切片內(nèi)的特定蛋白,通常使用比色或熒光標記。

-  免疫熒光 (IF) :與 IHC 類似,但使用熒光標記抗體以提高檢測參數(shù)數(shù)量。

-  質(zhì)譜成像 (MSI) :提供空間分辨的蛋白和代謝物數(shù)據(jù)。

空間基因組學

-  DNA FISH :在組織或細胞的空間環(huán)境中檢測特定 DNA 序列。

-  帶空間條形碼的單細胞測序 :將單細胞DNA測序與空間條形碼相結(jié)合,可得到細胞在組織中的位置信息。

空間代謝組學

-  質(zhì)譜成像 : 與空間蛋白組學類似,MSI 技術(shù)可用于繪制組織切片內(nèi)代謝物的分布圖。

多組學整合

-  同時檢測蛋白和核酸:比如結(jié)合viewRNA和免疫熒光方法,可在組織切片內(nèi)同時檢測蛋白和核酸。

進階成像技術(shù)

-  光片顯微鏡 : 可進行大體積組織的高分辨率 3D 成像,用于空間分辨的組學研究。

-  共聚焦和超高分辨率顯微鏡 :STORM(隨機光學重建顯微術(shù))和 PALM(光激活定位顯微術(shù))等技術(shù)可提高空間組學成像的分辨率。

這些方法通常結(jié)合使用,可對組織進行全面的空間分析,從而深入了解分子在其原生環(huán)境中的空間組織相互作用

空間蛋白組學方法比較


基于抗體的成像分析是空間蛋白組學常用的研究思路,主要包括的方法分類、大致流程、各自的優(yōu)缺點如下表:

表1. 基于抗體的空間組學成像分析方法對比

參考文獻:

Nat Methods. 2022 March ; 19(3): 284–295. doi:10.1038/s41592-021-01316-y.

Nature Methods | VOL 18 | September 2021 | 997–1012 | www.nature.com/naturemethods

怎么從現(xiàn)在的常規(guī)免疫組化

升級到多維空間組學成像?


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  • IHC/IF實驗的基本原理及操作流程

  • IHC/IF實驗操作疑難問題解析

  • 如何做好組織樣品多重免疫熒光染色

  • 案例分析:空間組學中多重IHC/IF的應(yīng)用與拓展

您不僅能一站式掌握免疫組化實驗中重難點問題的解決方案,還可深入了解空間蛋白組學如何助力高分研究的發(fā)表!

空間組學利器推薦

空間蛋白組學


表2. Invitrogen? 空間蛋白組學利器一覽

【組織低豐度蛋白檢測】Aluora? 空間組學信號擴增試劑盒

亮點:

  • 亮度高:新一代 Aluora熒光染料,性能優(yōu)異

  • 靈敏:極低豐度靶標也能檢測到

  • 無縫兼容光譜拆分:專為熒光光譜成像設(shè)計

  • 最多可同時檢測8個蛋白靶點

圖1. Aluora? 空間組學信號擴增試劑盒工作流程

(代表貨號:A40001338)

表3. Aluora? 空間組學信號擴增試劑選擇指南

【中高豐度靶點檢測】經(jīng)過組織染色驗證的直標一抗

亮點:

  • 背景低:無需使用二抗,背景信號顯著降低

  • 節(jié)省時間:無需二抗孵育步驟,縮短實驗時間

  • 中高豐度靶點檢測首選,切記選擇組織染色驗證過的直標抗體!

圖 2. 用直標一抗染色的 FFPE 正常人扁桃體 (A) 和扁桃體淋巴瘤 (B)。

【兼容BSA】ReadyLabel? 抗體標記試劑盒

亮點:

  • 方便:無需純化,20分鐘上手時間、1小時完成標記

  • 靈活:可標記任何IgG抗體,不挑物種、亞型和儲存液

  • 多色可選:7色熒光、生物素;還有Flex試劑盒,可搭配任意胺反應(yīng)性染料使用。光譜成像絕佳搭檔

圖3. 使用ReadyLabel試劑盒進行組織7色標記

(代表貨號:R10723)

空間轉(zhuǎn)錄組學


RNA轉(zhuǎn)錄本原位檢測】ViewRNA? 組織檢測試劑盒

亮點:

  • 固定組織切片驗證+優(yōu)化

  • 可搭配免疫熒光/組化使用,同時檢測蛋白和RNA

  • 同時可檢測多達 4 個 RNA 靶標

圖4. ViewRNA試劑盒在小鼠腦切片中的實驗結(jié)果

(代表貨號:QVT0700)


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