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  絕劍飛雪 2010-11-13 00:00:00

  那么難，怎么回答呢 黃曲霉毒素是一種肝臟毒素，對(duì)人和許多動(dòng)物都有極強(qiáng)的致癌性，其中黃曲霉毒素B1毒性Z大，致癌性Z強(qiáng)。因此，食品中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)是非常重要的。下面介紹的分離及測(cè)定黃曲霉毒素的方法——薄層色譜法（TLC）是常規(guī)分析中常用的一種重要方法。 一、 原理 樣品中黃曲霉毒素B1經(jīng)提取、濃縮、薄層分離后，在波長(zhǎng)365nm紫外光下產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光，根據(jù)其在薄層上顯示熒光的Z低檢出量來(lái)測(cè)定含量。 二、 試劑 （一） 。 （二） 石油醚（沸程30℃~60℃或60℃~90℃）。 （三） 甲醇。 （四） 苯。 （五） 乙腈。 （六） 無(wú)水或經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水。 （七） 丙酮。 以上試劑在試驗(yàn)時(shí)先進(jìn)行1次試劑空白試驗(yàn)，如不干擾測(cè)定即可使用，否則逐一檢查進(jìn)行重蒸。 （八） 苯-乙腈混合液：量取98mL苯，加2mL乙腈，混勻。 （九） 硅膠G：薄層色譜用。 （十） 三氟乙酸。 （十一） 無(wú)水硫酸鈉。 （十二） 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液。 1． 貯備液的制備：精密稱取1mg~1.2mg的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀釋至100mL，避光，置于4℃冰箱保存。該標(biāo)準(zhǔn)溶液約為10μg/mL。用紫外分光光度計(jì)測(cè)此標(biāo)準(zhǔn)溶液的Z大吸收峰的波長(zhǎng)及該波長(zhǎng)的吸光度值，并按下式計(jì)算此標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。 式中：X1黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，μg/mL；A——測(cè)得的吸光度值；312——黃曲霉毒素B1的分子量；19800——黃曲霉毒素B1在苯-乙腈混合液中的摩爾消光系統(tǒng)；f——使用儀器校正因素；用c（K2Cr2O7）=0.0004mol/L，c（K2Cr2O7）=0.002mol/L，c（K2Cr2O7）=0.0001mol/L三種溶液，以1cm石英杯，在Z大吸收峰的波長(zhǎng)（接近350mm）處用硫酸溶液（0.5mL硫酸+1000mL水）作空白，測(cè)以上三種溶液的吸光度（A），并按式E=A/c計(jì)算平均摩爾消光系數(shù)，再按式f=3160/E求出使用儀器的校正因素。若f大于0.95或小于1.05，則使用儀器的校正因素可略而不計(jì)。 根據(jù)計(jì)算，用苯-乙腈（98+2）混合液調(diào)到標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度恰為10μg/mL，并用分光光度計(jì)核對(duì)其濃度。 2． 純度的測(cè)定：取5μL（10μg/mL）黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液，滴加于薄層板上，用甲醇-（4+96）與丙酮-（8+92）展開(kāi)劑展開(kāi)，在紫外燈下觀察熒光的產(chǎn)生：只有單一的熒光點(diǎn)，無(wú)其他雜質(zhì)熒光點(diǎn)，原點(diǎn)上沒(méi)有任何殘留的熒光物質(zhì)。 （十三） 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)使用液：用苯-乙腈混合液準(zhǔn)確稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液至每毫升相當(dāng)于0.2μg及0.04μg黃曲霉毒素B1。 三、 儀器 （一） 分光光度計(jì)。 （二） 烘箱。 （三） 索氏抽提器。 （四） 電熱恒溫水浴。 （五） 電動(dòng)振蕩器。 （六） 玻璃板：5cm×20cm （七） 薄層板涂布器。 （八） 展開(kāi)槽：內(nèi)長(zhǎng)25cm寬6cm、高4cm。 （九） 紫外光燈：100W~125W，帶有波長(zhǎng)365nm濾光片。 （十） 微量注射器。 四、 操作步驟 由于月餅類糕點(diǎn)中含有大量油脂，為了使測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確，必須先除去油脂后再進(jìn)行測(cè)定。因黃曲霉毒素易溶解在油脂中，為了達(dá)到既要除去油脂便于測(cè)定，又要保證樣品中含有的黃曲霉毒素不被油脂帶走而造成測(cè)定結(jié)果偏差。因此，應(yīng)先將黃曲霉毒素從油脂中“趕”出來(lái)，然后再除去油脂。根據(jù)黃曲霉毒素不溶在或石油醚中，而油脂易溶于其中的特性，用或石油醚除去油脂就可達(dá)到目的。 （一） 去油脂 稱取20g樣品，放入濾紙筒內(nèi)，筒兩端塞以少許脫脂棉，置于索氏抽提器內(nèi)，在250mL油脂瓶?jī)?nèi)加入180mL-200mL石油醚，于70℃~80℃水浴上加熱回流提取油脂，抽提6h以上。除油脂完畢后，將濾紙筒取出放在瓷盤(pán)中避光自燃揮干備用，回收石油醚。 （二） 提取 將濾紙筒內(nèi)除去油脂后的樣品轉(zhuǎn)入250mL

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