免疫印跡法實驗原理和目的
免疫印跡（immunoblotting）又叫做蛋白質印跡（Western blotting），是通過抗原抗體的特異性結合來對復雜樣品中的某種蛋白進行檢測的方法。此方法是一種新的免疫生化技術。
免疫印跡法 (Western blotting) 是一種結合了免疫化學分析和技術高分辨率凝膠電泳的雜交技術。免疫印跡法是對蛋白質特性、表達與分布進行檢測Z常用的一種方法，例如病毒的抗體或抗原檢測、多肽分子的質量測定與組織抗原的定性定量檢測。免疫印跡法具有很強的特異性，很高的敏感度以及很大的分析容量。免疫印跡法(immunoblotting test,IBT)也叫做酶聯免疫電轉移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),由于其類似于Southern早先建立的檢測核酸的印跡方法 Southern blot ，因此也被叫做Western-blot。
電轉移方法
一般需要利用電泳方法將經電泳分離后的蛋白轉移到固相載體上，這個過程被叫做電泳印跡。以下為常用的兩種電轉移方法。
1.半干法:
用緩沖溶液浸濕的濾紙將凝膠和固相載體夾在中間，通電10-30min。
2.濕法：
在轉移緩沖溶液中浸放凝膠和固相載體夾心，由45min延長到過夜為轉移時間。
因為濕法有更大的使用彈性而且沒有對更多的時間和原料產生明顯地浪費，所以這里僅對濕法的基本操作過程進行描述。
需要采用可以識別一抗的第二抗體來識別目的蛋白，往往將購買的成品，即是如辣根過氧化物酶般已經被結合或標記了特定的試劑作為抗體。利用辣根過氧化物酶所催化的一個比色反應，即是這種標記，該反應的產物在固相載體上固定以及有特定的顏色，鑒別非常容易。所以能夠根據識別二抗來對一抗進行識別，從而使目標蛋白所在的位置被判斷出來。堿性磷酸酶系統和125I標記系統均屬于其他的識別系統。
實驗原理
蛋白質印跡法又叫做免疫印跡法，這是一種能夠對固定在固相載體上蛋白質進行檢測的免疫化學技術方法。待測蛋白除了可以為粗提物，而且還能夠經過一定的分離和純化。應用該項技術，待測蛋白的單克隆或多克隆抗體需要被利用來進行識別?？扇苄钥乖簿褪谴郎y蛋白的分離首先需要按照如分子量，分子大小，電荷以及其等電點等性質的差異采用不同的電泳方法。凝膠中的蛋白質通過電流被轉移到聚偏二氟乙烯膜上。目的蛋白的釣取可以以抗體作為探針利用抗體（一抗）與抗原發生特異性結合的原理來進行。尤其留心的是在將一抗加入之前，首先需要將非特異性蛋白加入，例如膜被牛血清白蛋白“封阻”，而使膜的非特異性結合得以避免。
實驗目的
對蛋白質印跡法的基本原理及其操作和應用進行了解。
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