ELISA法原理、特點和分類
酶聯免疫吸附實驗(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。該技術可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點。
基本原理
采用抗原與抗體的特異反應連接特異反應將待測物與酶,之后通過底物和酶發生顏色反應,從而用來定量測定。測定的對象既可以是抗體又可以是抗原。
在這種測定的方法中包括酶作用的底物(顯色劑)、固相的抗原或抗體(免疫吸附劑)以及酶標記的抗原或抗體(標記物)3種必要的試劑。
在測量的時候,首先在固相載體上結合抗原(抗體),然而它的免疫活性仍然會保留。之后將一種抗體(抗原)與酶結合,使得偶聯物(標記物)形成,它的原來的酶活性和免疫活性依然保留。當固相載體上的抗原(抗體)和偶聯物結合后,再和酶的相應底物反應而顯色。
其所生成的顏色深淺和欲測的抗原(抗體)含量正相關。可以使用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡對這種有色產物進行觀察,也可以使用分光光度計測定這種有色產物。它具有簡單快速的操作和很強的特異性。
特點
特異性強
抗體或抗原的選擇性是其特異性的來源。實質上,只在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間發生抗原抗體的結合。因為在化學結構和空間構型上兩者呈互補關系,因此抗原抗體反應的特異性非常的高。
靈敏性高
作為報告基團的酶為該測定法的靈敏度的來源。大家都知道,酶是一種有機催化劑,大量的催化反應均可以通過很少量的酶就能夠被誘導,從而使可供觀察的顯色反應現象產生。所以該體系通常被叫做酶放大體系。ELISA使得細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位,或在微克、甚至納克水平上對其進行定量實現了。
分類
該法由種類和變化可分為以下幾種:
(一)雙位點一步法
(二)捕獲法測IgM抗體
(三)應用親和素和生物素的ELISA
(四)雙抗體夾心法
(五)間接法
(六)競爭法
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