喹諾酮類藥物介紹

喹諾酮類(4-quinolones)，又稱吡酮酸類或吡啶酮酸類，是一類合成KJ藥。常用藥物有恩諾沙星，培氟沙星，諾菲沙星等。此類藥物主要對于多種革蘭陰性菌有殺菌作用，是一類人畜通用的藥物，被廣泛應用于畜牧、水產等養殖業中。但由于科學知識的缺乏和經濟利益的驅使，在養殖過程中養殖戶不遵守休藥期的規定，超標使用獸藥的現象普遍存在。人類長期食用獸藥超標的食品，藥物在體內蓄積，容易引發癌癥、畸形、抗藥性、青少年性早熟、中老年心血管疾病等病癥，對人類危害極大。

逗點生物開發出使用固相萃取法檢測動物源性食品中喹諾酮類藥物的含量，其中培氟沙星平均回收率100.7%，RSD 4.1%，恩諾沙星平均回收率96.6%，RSD 1.6%，為客戶提供關于喹諾酮類藥物檢測有效的解決方案。

一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測牛奶和豬肉中喹諾酮類藥物的含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。

二、實驗目標物
恩諾沙星（CAS:93106-60-6），培氟沙星（CAS:70458-92-3）。

三、應用范圍
本方法適用于動物源性中喹諾酮含量的HPLC檢測及確證。

四、參考標準
《GB/T 213312-2007動物源性食品中14中喹諾酮藥物殘留檢測方法》。

五、實驗材料
biocomma? Copure? HLB固相萃取柱200 mg/6 mL (Cat. No. COHLB6200)。

六、實驗方法
1、樣品提取
1.1牛奶
準確稱取牛奶/豬肉試樣5.0 g（極ng確至0.01）于50 mL離心管中，加入10 mL EDTA-Mellvaine緩沖液，渦旋1 min，超聲提取10 min，再于4000 r/min下離心5 min，取上清液，按上述步驟再提取兩次，離心，合并三次上清液，用EDTA-Mellvaine緩沖液定容至30 mL備用。

2、SPE柱凈化
(1)活化：凈化前固相萃取柱依次使用6 mL甲醇活化、6 mL水平衡。
(2)上樣和洗脫：取10 mL上清液上樣，棄去流出液，加2 mL 5 %甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，將小柱抽干，再用6 mL甲醇洗脫并收集洗脫液。
(3)重新溶解：洗脫液于50 ℃下氮吹至近干，加1 mL甲醇重新溶解，渦旋混勻，過0.22 μm有機濾膜，待上機測試。

3、HPLC條件
設備：Waters Alliance 2695
色譜柱：InerSustain?-C18 (4.6 mm X 250 mm，5 μm)
檢測器：Waters 2487雙波長檢測器 
檢測波長：254 nm
流動相：A：乙腈   B：0.1%甲酸水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1 梯度洗脫條件

流速：1 mL/min
進樣體積：20 μm

七、實驗結果
1、添加水平為1.2 mg/kg牛奶和豬肉基質中喹諾酮的添加回收結果
表2  添加水平為1.2 mg/kg牛奶和豬肉基質中喹諾酮的添加回收結果

2、添加水平為2.0 mg/L喹諾酮檢測的標準液相色譜圖

圖1 添加水平為2.0 mg/L喹諾酮檢測的標準液相色譜圖

本方法回收率和RSD滿足標準要求。