使用UHPLC-SEC色譜柱優化尿激酶分析方法
尿激酶是從新鮮人尿中提取的，或從人腎組織培養中獲得的一種酶蛋白，是臨床上一種常用的溶解血栓的藥物。它由高分子量尿激酶 (Mw=54000) 和低分子量尿激酶 (Mw=33000) 組成的混合物。
為使尿激酶達到ZJ分離效果，本應用使用粒徑2 μm的TSKgel UP-SW2000超GX液相尺寸排阻色譜柱與G2000SWXL色譜柱，對尿激酶進行了對比分析。
溶液的配制
色譜流動相配制：0.2 mol/L磷酸二氫鈉水溶液，用磷酸調pH至3.0 。
樣品：尿激酶測試方法優化溶液濃度：2.5 mg/mL
分析條件
儀器：Thermo Ultimate3000
色譜柱1：TSKgel UP-SW2000 (2μm, 4.6 mmI.D.×30cm)
色譜柱2：TSKgel G2000SWXL (5μm, 7.8 mmI.D.×30cm)
流速：0.18 mL/min for UP-SW2000、0.5 mL/min for G2000SWXL
柱溫：25℃
樣品盤溫度：10℃
進樣量：10 μL
檢測器：紫外檢測器@280nm
分析結果
圖1. UP-SW2000色譜柱分離譜圖
圖2. G2000SWXL色譜柱分離譜圖
結果與討論：
相較于G2000SWXL色譜柱，TSKgel UP-SW2000對多聚體、高分子量尿激酶、低分子量尿激酶的分離度均有所提高。
同時對比了等量溶質不同進樣體積，高濃度樣品小進樣量，分離度較好一些。UP-SW2000色譜柱可滿足藥典要求：高分子量尿激酶峰面積占90%以上，且與低分子量尿激酶分離度大于1.0。
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