超分辨時間分辨共聚焦熒光顯微系統

MicroTime 200 STED

• 基于倒置顯微鏡的完整共聚焦STED系統

• 光學分辨率低于50nm

• 640nm激發，595nm和660nm附加可選

• 支持門控STED（gSTED）和gSTED-FCS

• 壓電平移臺，用于2D，3D壽命成像和精確定位

• 匹配有高級版易用型數據采集、分析和可視化軟件SPT64

• AFM/FLIM/STED聯用的獨特升級

• 支持MicroTime 200可用的所有其他手段，即FLIM、FCS、FCCS、FLCS、FRET等

• FLIMbee 振鏡掃描附件，具有出色的掃描速度靈活性和優秀的空間精度
  

• 可以通過使用FLIMbee振鏡在X軸上進行線掃描來實現scanning FCS測量

產品簡介

        近年來，超分辨率顯微鏡得到了越來越多的關注。現在它已經超越了研發階段，并應用于研究以前被光的衍射極限所掩蓋的生物學樣品。超分辨率成像最普及的技術之一是受激發射損耗（STED）顯微鏡。STED通常用共焦顯微鏡為主體，因此非常適合添加到MicroTime 200中。將STED集成到系統中，一直朝著最高的穩定性和易用性發展。該系統能夠無需冗長的準備工作就可以運行STED顯微鏡，同時仍然可以選擇使用MicroTime 200的全部功能。

小于50nm的光學分辨率

        STED顯微鏡利用受激發射損耗的原理。在激發激光焦點中的熒光團后，用第二個波長更長的、甜甜圈狀的激光來通過主動損耗被激發的分子外圍。在MicroTime 200 STED中，甜甜圈的光斑是用EASYDOnut相偏板完成的。在光路中，它將STED激光焦點改變為甜甜圈形狀，而激發光不受影響。這種簡單的實現方式免去了來自同一根光纖的兩個激光束的對準工作，并且實現了空間分辨率小于50 nm。由于MicroTime 200 STED的時間分辨數據采集原理，還可以將時間門控應用于所有測量數據。這種門控STED（gSTED）方法可進一步提高圖像分辨率，并減少FCS的觀測時間。

激發波長可選

         MicroTime 200 STED配有激光耦合單元，該單元將激發光與STED損耗光集成在一起。標準的激發波長是640nm，可選與595nm和660nm激光組合，用于雙組分掃描成像。由于STED損耗光在765 nm處具有很高的功率，因此在操作儀器時要特別注意以確保使用者安全。MicoTime200的標準激光耦合單元也可以連接到系統上，用于非STED應用，如FLIM、FRET或FCS。

        激光功率和重復頻率可以通過多通道激光驅動器PDL 828“ Sepia II”進行靈活調整，該驅動器可以并行驅動多個激光器，從而實現脈沖交替激發（PIE）等高級功能。激發脈沖和STED脈沖之間的時間延遲也是可調的，以實現最高的靈活性和最佳的STED分辨率。

掃描技術

        MicroTime 200平臺的強大的多功能性得到了FLIMbee振鏡的補充，它可以提供從非常慢到快的掃描速度，同時保持較高的精度。高靈活速度的掃描可以用于rapidFLIM技術，來實現從磷光壽命成像（PLIM）到快速熒光壽命測量的應用。此外，由于其高精度和高靈敏度，FLIMbee振鏡適用于STED進行超分辨顯微成像，從而使成像分辨率提升至單分子水平。

         配備了FLIMbee振鏡的MicroTime200是單光子檢測（SMD）的理想選擇，如：spFRET、PIE-FRET、(STED-)FCS、FLCS,、FLCCS、雙聚焦FCS (2fFCS)，甚至各向異性的測試。此外，還可以進行共聚焦和NDD檢測的雙光子激發（TPE）。

        FLIMbee振鏡的核心是由三個高精度轉向鏡組成，它們具有出色的線性度、重復性和低漂移。兩個Y軸振鏡保證激光光束固定在物鏡入口。這個鏡子結構最大程度減小了像場的漸暈，確保在較寬的掃描范圍內保持恒定的聚焦體積。使用100x物鏡時，FLIMbee振鏡可提供低至10nm的最小像素尺寸。

單光子靈敏度的探測子系統

        在MicroTime 200 STED中，可通過壓電平臺方便地進行掃描，可選高精度PiFoc壓電Z軸實現3D成像。壓電掃描可確保較高的重復定位精度和穩定性，這對于高質量STED圖像至關重要。系統最多可配置六個并行檢測通道。對于使用在765 nm損耗光的STED染料，通常使用SPAD，因為SPAD在該光譜范圍內具有高達70％的高檢測效率。

皮秒分辨率的門控STED

        TCSPC模塊采用皮秒分辨率的時間標記的時間分辨（TTTR）數據采集模式。所獲取的TTTR數據不僅可以用于常規STED成像，還可以執行門控STED（gSTED）測量。TTTR數據采集模式的優勢在于，它僅基于一種基本數據格式，就可以實現包含STED和其它多種功能，例如FLIM、FCS甚至符合相關（“反聚束”）等應用。 PicoQuant的所有可用TCSPC模塊都支持TTTR格式。

直觀的數據采集和分析

        SymPhoTime 64，是MicroTime 200 STED的系統軟件, 具有專用于STED數據采集和分析功能。比如，預設的時間門控已集成在測試預覽功能中，并且可以在數據分析過程中，為更高STED分辨設置更加靈活的時間門控。獨特的熒光“模式匹配”功能可以用于從同樣STED激光波長記錄的數據中分離多種物質。

FLIM、FRET、FCS等

         MicroTime 200 STED不僅具有STED和STED-FCS功能，而且還支持MicroTime 200可用的所有其他測量和分析程序。這包括FLIM，FCS，FCCS，FLCS，FRET，PIE-FRET或強度時間軌跡等等。