地克珠利屬三嗪苯乙腈化合物，妥曲珠利屬三嗪酮化合物，兩種藥物都具有廣譜抗球蟲活性，廣泛用于雞球蟲病的治療。由于地克珠利較易引起球蟲的耐藥性，甚至與妥曲珠利共用造成交叉耐藥性。且有資料證實(shí)，妥曲珠利在仔雞可食用組織中殘留時間很長，停藥24天后在胸肌中仍能測出殘留藥物，因此，美國至20世紀(jì)末仍未批準(zhǔn)該產(chǎn)品上市。

本實(shí)驗(yàn)參考標(biāo)準(zhǔn)《動物性食品中地克珠利和托曲珠利砜殘留量的測定 高效液相色譜法》（征求意見稿），使用EZsep?AL-B和HLB固相萃取柱進(jìn)行樣品凈化，E.T.氮吹濃縮儀進(jìn)行濃縮，高效液相色譜進(jìn)行檢測，并對方法做了部分優(yōu)化，從而建立了一種能同時檢測地克珠利、托曲珠利、托曲珠利亞砜和托曲珠利砜殘留量的分析方法。

關(guān)鍵詞：

地克珠利；托曲珠利；固相萃取

1.1 儀器與試劑

LC-20AD液相色譜儀，島津企業(yè)管理（中國）有限公司；

MPREP-SPE08手動固相萃取裝置，貨號：PZ0008，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

EZsep?AL-B固相萃取柱（2g/12mL），貨號：PZ11413，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/3mL），貨號：PZ12613，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠；

乙腈，甲醇等試劑均為色譜純，購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙酸，無水硫酸鈉，氯化鈉等化學(xué)品均為分析純或以上，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

甲醇中4種獸藥混標(biāo)/SN/T 2318-2009標(biāo)準(zhǔn)溶液，10μg/mL，壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

1.2 工作液配制

分別移取10μg/mL的甲醇中4種獸藥混標(biāo)溶液0.01、0.025、0.05、0.075、0.1mL用流動相稀釋至1.0mL容量瓶中，得到濃度分別為0.1、0.25、0.5、0.75、1.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

準(zhǔn)確稱取豬肝試樣5.0g，置于50mL具塞離心管中，先加入10mL乙腈,均質(zhì)5min。后加入5g無水硫酸鈉，1g氯化鈉渦旋1min，振蕩提取10min，8000r/min離心5min，取上清液移至另一個50mL具塞離心管中，加正己烷30mL，振搖1min，8000r/min離心5min，分離乙腈層。殘余物再按上述步驟重復(fù)提取一次，乙腈層經(jīng)同一份正己烷分配，振搖1min，8000r/min離心5min，分離乙腈層，合并乙腈層，作為待凈化液，待凈化。

1.3.2 凈化與濃縮

將EZsep?AL-B固相萃取柱（2g/12mL，貨號：PZ11413）以10mL乙腈活化后，取1.3.1待凈化液上樣，上樣結(jié)束后再用5mL乙腈淋洗固相萃取小柱，后以7mL80%乙腈水溶液洗脫并收集洗脫液，以E.T.氮吹濃縮儀，60℃氮?dú)鉂饪s至近干再加乙腈0.5mL，用水稀釋至10mL，渦旋，待二次凈化。將EZsepT?HLB固相萃取柱（200mg/ 3mL，貨號：PZ12613），分別以6mL甲醇、6mL水活化后取1.3.2待二次凈化液上樣，上樣結(jié)束后再用5mL10%乙腈水淋洗固相萃取小柱，后以3mL乙腈分三次洗脫固相萃取小柱并收集洗脫液，以E.T.氮吹濃縮儀，60℃氮?dú)鉂饪s至近干，再加1.0 mL初始流動相，渦旋，微孔濾膜過濾，高效液相色譜測定。

1.4 LC分析

色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；

流動相：A:0.1%乙酸水溶液 B:乙腈；

流速：1.0mL/min；檢測波長：250nm；

進(jìn)樣量：50μL。

表1 流動相梯度洗脫表

表2 加標(biāo)回收率結(jié)果

圖1 0.25μg/mL混標(biāo)色譜圖

圖2 50μg/kg樣品添加色譜圖

圖3 樣品空白色譜圖

本次實(shí)驗(yàn)使用EZsep?AL-B固相萃取柱（2g/12mL，貨號：PZ11413）和EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/3mL，貨號：PZ12613），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司，對豬肝中地克珠利、托曲珠利、托曲珠利亞砜和托曲珠利砜殘留量進(jìn)行測定，其加標(biāo)回收率范圍在71.1%~87.4%之間，RSD在2.0%~7.4%之間。準(zhǔn)確性和精密度均滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，且實(shí)驗(yàn)方法穩(wěn)定、可靠。

1.《動物性食品中地克珠利和托曲珠利砜殘留量的測定 高效液相色譜法》（征求意見稿）