應用分享︱FcR親和色譜柱在抗體生產(chǎn)工藝條件優(yōu)化中的應用

2024-06-07 11:15:07 205閱讀次數(shù)

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抗體藥物和抗體偶聯(lián)藥物的糖鏈結構不同，會對藥效產(chǎn)生很大影響。東曹開發(fā)的以重組人源FcγⅢa受體（FcγRⅢa）為固定化配基的親和色譜柱TSKgel FcR-ⅢA-NPR可對這些糖鏈進行分析。

圖1中顯示了該色譜柱可以應用于抗體生產(chǎn)中的各種工藝條件優(yōu)化，例如篩選出ADCC活性高的細胞株、培養(yǎng)基的研究、培養(yǎng)細胞時的在線監(jiān)控等。

圖1 使用TSKgel FcR-IIIA-NPR分析抗體藥物糖鏈的應用范圍

除此以外，還可以應用于純化抗體的生產(chǎn)批次的質(zhì)量評價、原研抗體和抗體生物類似藥的比較及評價、ADC藥物純化后的性能評價等方面。該分析柱的同類制備柱TSKgel FcR-ⅢA-5PW還可以進行實驗室規(guī)模的抗體半制備層析。

本期推文我們將分享兩篇關于培養(yǎng)基研究、抗體糖鏈結構/長度影響、ADC親和色譜分析的最新研究文獻。

文獻一

題目：

Intracellular polyamine depletion induces N-linked galactosylation of the monoclonal antibody produced by CHO DP-12 cells

文獻內(nèi)容要點：

通過動物細胞培養(yǎng)獲得的抗體藥物，由于N-連接型糖鏈的不均一性會對藥效產(chǎn)生影響，所以需要再生產(chǎn)工藝中進行有效控制。作為抗體藥物生產(chǎn)細胞系之一的CHO細胞，在無血清培養(yǎng)基中不能生物合成粗細胞生長因子多胺。因此我們調(diào)查了在抗體生成中多胺對N-連接型糖鏈的影響。

其結果是，添加多胺生物合成抑制劑α-二氟甲基鳥氨酸（DFMO）可減弱細胞增殖，并使抗體產(chǎn)量減少30%。而另一方面，由于多胺缺失引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，會導致β-1, 4-葡萄糖醛酸轉移酶1 (B4GAT1) 的mRNA量增加，使半乳糖基化的IgG量突增。另外，還從外部向細胞內(nèi)多胺枯竭的細胞添加了多胺，其結果是抗體產(chǎn)生和半乳糖基化的恢復受到抑制。由此可以看出，添加多胺對抗體穩(wěn)定生產(chǎn)有用，以及抗體質(zhì)量控制的可能性。

在這篇論文中，作者使用TSKgel FcR-ⅢA-NPR親和色譜柱分析了抗體的半乳糖基化程度。

文獻鏈接：

https://doi.org/10.1016/j.jbiotec.2023.10.008

文獻二

題目：

Chromatographic analysis of the N-glycan profile on therapeutic antibodies using FcgRIIIa affinity column chromatography

文獻內(nèi)容要點：

使用FcR-ⅢA-NPR親和色譜柱研究了各種抗體藥物、Fc、Fab和ADC的結合糖鏈結構（長度）對保留時間的影響。含有不均一糖鏈的抗體顯示了多個分離峰。而含有均一糖鏈的抗體則顯示了單個洗脫峰。另外，在Cys偶聯(lián)ADC中，觀察到于原抗體相同數(shù)量或更多的洗脫峰，但在Lys偶聯(lián)ADC中欸有觀察到明確的洗脫峰分離。