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重組片段抗體定制服務

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抗體/抗體片段抗原產生特異性和高效結合性,在生化和診斷等領域發揮不可替代的作用。傳統生產單克隆抗體的雜交瘤技術,由于其自身研發周期比較長,生產的成本相對較高,已經成為大規模、快速生產抗體/抗體片段的瓶頸。近年來,隨著基因重組和生物工程技術的不斷進步,高通量篩選和大規模生產抗體/抗體片段成為現實。

抗原結合片段 (Fab) 是抗體上與抗原結合的區域。 它包含每條重鏈和輕鏈的一個恒定區和一個可變區。 只有重鏈和輕鏈的可變區融合在一起形成單鏈可變片段(scFv),其大小只有Fab片段的一半,但保留了原有的特異性。另一種小抗體片段,單域抗體,又稱域抗體、VHH、VNAR或sdAb,是一種由單個單體可變抗體結構域組成的抗體片段,缺少常規的輕鏈和重鏈的CH結構域。

泰克生物是一家專業的CRO服務提供商,能為我們的客戶提供高質量的重組抗體表達服務,如scfv抗體片段、fab抗體片段、sdAb單域抗體、重鏈抗體等重組抗體構建和表達服務。另外,泰克生物目前在建的5000平米的GMP研究中心,能夠為各類工業客戶提供批量的重組抗體生產服務。

 

 抗體片段特性

 

重組片段抗體定制服務.jpg 

 

抗體類型

組分

分子量(kDa)

化合價

半衰期(h)

Fab

VH+CH1+VL+CL

(輕重鏈利用二硫鍵連接)

50-55

單體

12-20

scFv

VH+VL

30

單體

2-4

sdAb

VHH

15

單體

0.5

Fc融合抗體

(抗體+CH2+CH3)*2

/

二聚體

/

di-scFv

scFv*2

60

二聚體

4-8


 抗體片段表達系統常用宿主

  



表達系統

菌株/細胞

特點

E.coli

BL21(DE3)

Ion-ompT,有效防止重組蛋白在胞內被水解

Rosetta(DE3)菌株含有pRARE質粒,能夠提供AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA稀有密碼子的tRNA,能夠提供更加“通用”的蛋白質表達,從而提升目的蛋白表達水平,該質粒具有氯霉素抗性。

Rosetta

哺乳動物細胞

CHO-S

是實驗室常用的細胞系,作為貼壁和懸浮培養生長良好,生產率高,是大規模培養和GMP程序的理想選擇;可進行許多翻譯后修飾以獲得生物仿制藥,顯示出生物相容性和藥物活性;適用于無蛋白、無動物生產、無血清培養條件,并具有更好的穩定性和安全性。

CHO-K1

Freestyle 293F

是一類能夠在無血清中高表達蛋白的野生型293細胞系,可以高效表達蛋白。

Expi 293F

具有高度可轉染行,展示出較高的蛋白表達水平,相比標準的懸浮適應293細胞,表現出更快速的細胞生長和更高的培養存活率。


 抗體片段高表達策略


優化方式

特性

融合抗體

Fab 基因表達時,5'端帶上細菌蛋白信號肽基因的Fd基因和L鏈基因,可在大腸桿菌細胞壁的周質腔內分泌型表達,形成完整的立體折疊。Fab片段保持了親本抗體的抗原結合特異性和生物學活性。Fd基因片段和L鏈基因可以分別構建在兩個載體上,然后共轉染細胞,也可以構建在一個載體上轉染細胞進行表達。

抗體序列本身的修飾

經定點突變可以改變抗體在某些關鍵位點的氨基酸,從而優化其穩定性,增強與抗原的親和性,提高表達產量。

表達系統的選擇

應考慮的因素有:實驗設備、需表達抗體毒性、所需營養物、是否需要抗體高產率、抗體純化工藝、生產成本、調控元件、生物安全方面等。

密碼子優化

天然抗體/scFv來源于真核生物,其密碼子很可能不為E.coli所偏好,使用偏好密碼子能提高細胞對環境及抗體的適應性,減少重組抗體的錯誤折疊率。

條件優化

需要考慮的因素包括溫度、培養基配比、pH、培養時間及誘導條件等。


 抗體表達服務內容

 

實驗內容

交付

周期

基因合成&載體構建

1. 重組抗體

2. 表達載體

3. 克隆菌株

4. 實驗報告

6-8周

質粒抽提

細胞轉染&表達抗體

抗體純化(SDS-PAGE)


 泰克可提供的服務

 

片段抗體構建和生產服務


片段抗體包括Fab抗體、scFv和VHH抗體(駝源納米抗體)等。客戶可直接提供Fab、scFv或VHH序列,交由泰克生物進行重組表達并獲得高純度產品。如客戶僅有靶抗原信息,則可委托泰克生物進行動物免疫并篩選scFv、VHH等抗體。

 

重組抗體293F/CHO細胞表達服務


全套Gibco無血清哺乳細胞培養,適用于科學家對天然構象蛋白的體外重組表達需求,如糖基化修飾,磷酸化修飾等。為客戶提供的全套服務滿足GMP-like體系,包括細胞種子庫來源文件記錄體系、細胞種子批檢定,動物源成分的質控,標準化細胞培養與轉化操作流程,全套GE提供的純化填料和設備等準則進行生產的重組蛋白。

 

 服務優勢

 

? 詳細的實驗設計和論證:包含稀有密碼子分析,抗體序列分析,表達系統的選擇,表達載體構建方案,抗體修飾等

? 多種標記抗體表達:His標簽融合表達,同位素標記表達、生物素標記表達

? 多個種屬的重組抗體制備:包括人源,鼠源,兔源,羊源,犬源,駱駝源,羊駝源,牛源等

? 抗體修飾控制:糖基化修飾和磷酸化修飾多寡控制

? 多重表達模式:穩定表達和瞬時表達

? 配套的哺乳體系高表達載體和各種規格的放大體系

? 低內毒素水平:LAL檢測法<0.1EU/ug

? 完整的文件追溯體系,保證您的產品所有材料、試劑和制備信息可追溯


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