Hieff NGS^® ds-cDNA Synthesis Kit是用于Illumina^®/MGI^®測(cè)序平臺(tái)的RNA測(cè)序文庫的cDNA合成試劑盒，包含高效RNA反轉(zhuǎn)錄試劑，常規(guī)ds-cDNA合成試劑。可銜接Hieff NGS^® OnePot cDNA&gDNA Library Prep Kit（Yeasen Cat#13502）進(jìn)行后續(xù)建庫。本試劑盒提供的所有試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，最大程度上保證了文庫構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

產(chǎn)品組分

組分編號(hào)和名稱			13488ES08	13488ES24	13488ES96
13488-A		Random Primer	8 μL	24 μL	96 μL
13488-B		1st Reaction Buffer	64 μL	192 μL	786 μL
13488-C		1st Strand Enzyme Mix	16 μL	48 μL	192 μL
13488-D		2nd Reaction Buffer	56 μL	168 μL	672 μL
13488-E		2nd Strand Enzyme Mix	24 μL	72 μL	288 μL

運(yùn)輸與保存方法

干冰運(yùn)輸。-20℃保存。有效期1年。
 

注意事項(xiàng)

關(guān)于操作

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2. 請(qǐng)于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數(shù)次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。

3. 推薦在帶熱蓋的PCR儀中進(jìn)行各步驟反應(yīng)，使用前應(yīng)預(yù)熱PCR儀至反應(yīng)溫度附近。

4. 請(qǐng)使用無RNase污染的耗材，并對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域定期進(jìn)行清理，推薦使用ThermoFisher公司的RNAZap^TM高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。

5. PCR產(chǎn)物因操作不當(dāng)極容易產(chǎn)生氣溶膠污染，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。推薦將PCR反應(yīng)體系配制區(qū)和PCR產(chǎn)物純化檢測(cè)區(qū)進(jìn)行強(qiáng)制性的物理隔離；配備文庫構(gòu)建專用移液器等設(shè)備；定時(shí)對(duì)各實(shí)驗(yàn)區(qū)域進(jìn)行清潔（推薦使用ThermoFisher公司的DNAZap^TM高效核酸去除噴霧），以保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境的潔凈度。

6. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

自備材料（Other Material）

1. DNA純化磁珠：Hieff NGS^® DNA Selection Beads（Yeasen Cat#12601）或AMPure^® XP Beads（A63880）或其他等效產(chǎn)品。

2. 文庫質(zhì)檢：Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/ High Sensitivity Chip或其他等效產(chǎn)品；文庫定量試劑。

3. 其他材料：無水乙醇、無菌超純水、低吸附槍頭、PCR管、磁力架、PCR儀等。
 

使用方法

Step 1 RNA變性

1. 將 Random Primer 室溫解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。按照下表配置反應(yīng)液：

表1 RNA預(yù)變性反應(yīng)體系

2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。

3. 將上述PCR管置于PCR儀中，按照表2所示設(shè)置反應(yīng)程序，進(jìn)行RNA的預(yù)變性。

表2 RNA預(yù)變性反應(yīng)程序

Step 2 第一鏈cDNA的合成（1^st Strand Synthesis）

1. 將第一鏈合成試劑從-20°C取出，室溫解凍，顛倒混勻后瞬離。按表3所示，配制第一鏈cDNA合成的反應(yīng)液。

表3 第一鏈cDNA合成反應(yīng)體系

2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。

3. 將上述PCR管置于PCR儀中，按照表4所示設(shè)置反應(yīng)程序，進(jìn)行第一鏈cDNA的合成。反應(yīng)結(jié)束后立即進(jìn)行第二鏈cDNA的合成。

表4第一鏈cDNA合成反應(yīng)程序

Step 3第二鏈cDNA的合成（2^nd Strand Synthesis）：

1. 將第二鏈合成試劑從-20 °C取出，解凍后顛倒混勻；按照表5所示，配制第二鏈cDNA合成反應(yīng)液。

表5第二鏈cDNA合成反應(yīng)體系

2. 使用移液器輕輕吹打混勻，瞬離將反應(yīng)液離心至管底。

3. 將上述PCR管置于PCR儀中，按照表6所示設(shè)置反應(yīng)程序，進(jìn)行第二鏈cDNA的合成。

表6 第二鏈cDNA合成反應(yīng)程序

Step 4

第二鏈cDNA產(chǎn)物可銜接Hieff NGS^® OnePot cDNA&gDNA Library Prep Kit（Yeasen Cat#13502）進(jìn)行后續(xù)建庫。

HB220110