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Human Leptin ELISA Kit 人瘦素ELISA檢測試劑盒

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詳細介紹

 

瘦素是一種由脂肪細胞分泌產生的蛋白質類激素,它通過抑制饑餓來幫助調節能量平衡,被稱為“饑餓激素”的胃饑餓素可拮抗瘦素發揮作用。瘦素分子量為16 kDa,是由146個氨基酸殘基組成的非糖基化蛋白,人瘦素與小鼠和大鼠的同源性分別為87%和84%,且人瘦素在小鼠和大鼠中可發揮生物學活性。瘦素主要產生于白色脂肪組織的脂肪細胞,也由褐色脂肪組織、胎盤、卵巢、骨骼肌、胃、乳腺上皮細胞、骨髓、胃主細胞和P/D1細胞產生。瘦素的表達情況受體內激素、細胞因子及營養狀態影響,如參與正能量平衡的胰島素和糖皮質激素可促進瘦素表達,而參與負能量平衡的兒茶酚胺則抑制瘦素的表達。在肥胖人群中,瘦素的敏感性降低,導致在能量儲備高的情況下無法察覺飽腹感。

翌圣Human Leptin ELISA(酶聯免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯免疫吸附測定試劑盒,用于定量測定血清、血漿、細胞培養上清中的人瘦素(Human Leptin)。特異性抗人瘦素抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本,經過孵育,樣本中存在的人瘦素與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質后,加入檢測抗體孵育結合,經洗滌,再加入酶結合物(Streptavidin-HRP)孵育結合。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中人瘦素的濃度成正比。加入終止液終止反應,在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。

 

產品信息

貨號

97036ES48 / 97036ES96 

規格

48 T / 96 T

檢測范圍

15.63-1000 pg/mL

檢測方法

雙抗夾心法

檢測物種

檢測時長

5小時

靈敏度

0.586 pg/mL

稀釋線性

81.9 - 96.1 %

回收率

73.9 - 106.9%

板內差

2.9%

板間差

3.6%

 

實驗數據

  1. 標曲數據

數據擬合繪制標準曲線,生成的標曲用于實驗數據分析。

標準曲線圖

 

  1. 靈敏度檢測

人瘦素的最低檢測限為0.586 pg/mL,通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。

  1. 精密度檢測

酶標板內精密度

3個已知濃度的樣本酶標板內重復測定20次,評估酶標板內的精密度。

酶標板間精密度

3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測30次,評估酶標板間的精密度。

項目

板內精密度

板間精密度

樣本

1

2

3

1

2

3

20

20

20

30

30

30

平均值

14.8

98.1

521.1

14.9

98.5

522.4

標準差

0.8

1.4

8.5

1.1

1.9

8.7

變異系數%

5.7

1.5

1.6

7.1

1.9

1.7

  1. 回收率檢測

  通過不同水平的人瘦素添加于樣本中來測定回收率,其回收率如下:

樣本類型

平均回收率(%)

范圍(%)

血清

91.7

77.5-106.9

血漿

89.0

75.8-105.3

細胞培養上清

87.9

73.9-101.5

  1. 稀釋線性檢測

血清稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

91.1

89.6-92.3

1:04

86.9

85.6-88.6

1:08

86.9

85.8-88.1

1:16

91.7

90.7-93.7

 

血漿稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

91.2

90.6-92.1

1:04

86.2

82.7-88.2

1:08

84.3

82.2-85.5

1:16

91.7

90.7-93.4

 

細胞培養上清稀釋比例

平均期望值(%)

范圍(%)

1:02

89.2

86.8-93.8

1:04

85.4

83.1-88.5

1:08

86.7

81.9-92.3

1:16

94.6

93.2-96.1

  1. 樣本

應用本試劑盒,檢測若干健康志愿者的樣本,志愿者的用藥史不詳。

樣本類型

樣本數目

平均值(pg/mL)

樣本值(pg/mL)

血清

10

7560.0

645.8-19580.0

肝素血漿

10

9461.5

21.9-20524.6

EDTA血漿

10

11340.4

4056.9-32826.0

枸櫞酸鈉血漿

10

5240.5

1325.3-15307.8

細胞培養上清

10

n.d.

n.d.

n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內的15.63 pg/mL。

  1. 測定特異性

本試劑盒識別天然和重組人瘦素。下述因子進行了特異性的評估,沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。

Recombinant human:

Recombinant mouse:

Recombinant rat:

IFN-γ

IL-17A

IFN-γ

IFN-γ

IL-1β

IL-18

IL-1β

IL-1β

IL-2

IL-21

IL-2

IL-4

IL-4

IL-22

IL-4

IL-6

IL-5

IL-23

IL-6

IL-10

IL-6

MCP-1

IL-10

TNF-α

IL-8

TGF-β1

IL-17A

 

IL-10

TNF-α

TNF-α

 

IL-12

VEGF

 

 

 

檢測簡圖

 

 

疑問解答

問題

造成原因

解決方法

標曲不好

移液量不準確

檢查移液器,按時校準,仔細操作,充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。

稀釋方法不恰當

顯色值偏低

孵育時間太短

給予足夠的孵育時間,樣本和溶解的標準品隔夜后更換。

移液量不足或稀釋不當

校準移液器和規范操作

CV偏高

酶標板清洗不當

使用正確的洗滌工序;如果使用洗板機,檢查所有的端口是否堵塞。

受污染的洗液

準備新鮮洗液

靈敏度較低

試劑盒儲存不當

按照產品組分表進行保存。

 

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