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擴增逆轉雙功能酶Tth DNA Polymerase (5 U/μL)

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詳細介紹

 

Tth DNA Polymerase一種嗜熱菌Thermus thermophilus HB8中發現的耐熱DNA聚合酶。在Mg2+存在的條件下,該酶具有5′-3′ DNA聚合酶活性和5′-3′ 核酸外切酶活性,無3′-5核酸外切酶活性,可廣泛用于PCR擴增反應。在Mn2+存在的條件下,該酶在55-70℃條件下表現出較強的逆轉錄活性,可用于一步法RT-PCR反應。

 

產品組分

組分編號

組分名稱

產品編號/規格

14607ES72

(250 U)

14607ES80

(1250 U)

14607-A

Tth DNA Polymerase (5 U/μL)

50 μL

250 μL

14607-B

5×Tth RT-PCR Buffer 

1 mL

4×1.25 mL

14607-C

10×Tth PCR Buffer (with Mg2+)

500 μL

2×1.25 mL

14607-D

50mM Mg(OAc)2

250 μL

1.25 mL

14607-E

dNTP Mixture (10 mM each)

150 μL

750 μL

 

運輸與保存方法

干冰運輸。-20以下儲存,有效期2

 

單位定義

用活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物,在 74℃,30 分鐘內,攝入 10 nmol 的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為 1 個活性單位(U)。

 

注意事項

1Buffer 在融解時,如果出現少量沉淀屬正?,F象,請顛倒混勻后使用。

2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3)本產品僅作科研用途!

 

使用方法

推薦PCR反應操作流程

1、反應體系配制

組分

體積(μL)                     

10×Tth PCR Buffer (with Mg2+)

5

Tth DNA Polymerase (5 U/μL)

0.5

dNTP Mixture (10 mM each)

1

上游 Primer 10μM

2

下游 Primer 10μM

2

Template DNA

50 pg- 1μg

ddH2O

to 50 

【注】:可根據具體實驗調整Tth DNA Polymerase、上下游引物和的dNTP Mixture用量。

2PCR反應程序

循環步驟

溫度(ºC

時間

循環數

預變性

94

30 sec-5 min

1

變性

94

30 sec

 

退火

50-70

30 sec

35

延伸

72

60 sec/kb

 

終延伸

72

10 min

1

【注】:可根據具體實驗調整反應條件。

推薦RT-PCR反應操作流程

1、反應體系配制

組分

體積(μL)                     

5×Tth RT-PCR Buffer 

10

Tth DNA Polymerase (5 U/μL)

1.5

50mM Mg(OAc)2

2.5

dNTP Mixture (10 mM each)

1.5

上游 Primer 10μM

2

下游 Primer 10μM

2

Template RNA 

50 pg- 1μg

ddH2O

to 50 

【注】:可根據具體實驗調整Tth DNA Polymerase、上下游引物和的dNTP Mixture用量。

2、RT-PCR反應程序

循環步驟

溫度(ºC

時間

循環數

逆轉錄

55-70

30 min

1

預變性

94

30 sec-5 min

1

變性

94

30 sec

 

退火

50-70

30 sec

35

延伸

72

60 sec/kb

 

終延伸

72

10 min

1

【注】:可根據具體實驗調整反應條件。

HB221123

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