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類器官研究利器 | 羅氏Liberase組織消化酶

來源:羅氏診斷產品(上海)有限公司      分類:應用方案 2024-06-11 09:15:07 41閱讀次數
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類器官(Organoids)

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類器官(Organoids)是一種由組織成體細胞或者多能干細胞發育,并與體內器官具有類似結構和功能的復雜三維組織。其能夠模擬真實器官發育的關鍵事件:細胞分序與空間特異性譜系分化,類器官含有不同的細胞分化類型并且能夠模擬真實器官功能。相比于傳統二維細胞培養和動物模型,類器官可以提供更加接近人體內組織結構的三維微環境,重現體內組織器官的細胞類型組成與功能。


類器官體外培養可以從患病組織中獲取單細胞,并在特殊條件下進行培養獲得。這種類器官具有與患者組織相似的遺傳特征,在疾病模型的構建中,使用患者自身來源的細胞培養類器官,可以實現藥物在特定個體中的療效評估。此外,患者來源的類器官,也可能為患者提供較低的免疫排斥反應,更加適合移植的組織,在損傷再生修復以及器官移植領域有著廣闊的前景。類器官也可以通過多能干細胞培養而獲得,模擬器官發育的原始過程,結構分化更接近于胎兒階段的組織。這一特性有助于研究新生兒相關系統疾病,如利用類器官感染模型研究某些疾病的發病機制及藥物篩選。


在與類器官相關的各類醫學研究和應用中,從器官或者組織中分離出健康的細胞是重要的關鍵步驟。為此,羅氏開發了可靠的組織消化產品,高純度組合酶幫助客戶在各種類器官研究和下游應用中收獲高活性的細胞——羅氏Liberase系列產品。


羅氏診斷CustomBiotech提供Liberase系列產品特點:

 高效組織解離,不影響細胞活率

不影響組成類器官單細胞功能

不使用任何哺乳動物或禽類來源的原料,降低污染風險

高度的結果重復性


高效的組織解離,

不影響細胞活率

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羅氏診斷CustomBiotech提供的Liberase中包含針對不同組織設計的特異性酶混合物組合,對梭菌蛋白酶和胰蛋白酶濃度進行優化和控制,專有的純化技術去除內毒素,這些設計幫助細胞的活力和功能性獲得顯著提升。


Johannes Linxweiler等從患者組織中分離細胞進行類器官研究,將組織預先進行機械處理后,然后分別使用膠原酶IA和Liberase TM對同樣來源的樣本進行組織解離。結果發現Liberase TM始終表現出更好的組織解離效果,分離出更多的同質球體。此外,經過Liberase TM消化生成的球體比膠原酶IA消化生成的球體中細胞活率更高,更適合對下游進行研究。

圖1.使用不同消化酶處理組織生成類器官

來源:Linxweiler J, Hammer M, Muhs S, et al. Patient-derived, three-dimensional spheroid cultures provide a versatile translational model for the study of organ-confined prostate cancer. Journal of cancer research and clinical oncology, 2019, 145: 551-559.


羅氏診斷CustomBiotech提供的Liberase在研發中優化的產品設計和酶發酵純化過程,使得各批次間的高度一致性,在實際應用中節省大量時間和資源,適用于各種組織類型的解離,如Driehuis E總結,Liberase已經成熟用于各種不同類型組織的類器官應用,包括但不限于小腸,胃,胰腺等。同時對于同樣的組織類型,Liberase消化所需時間更短,能夠有效加速類器官相關研究,加速后續應用類器官進行藥物篩選。


不影響組成類器官單細胞功能性

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類器官含有不同的細胞分化類型,因此一個重要研究方面就是對組成類器官中的單個細胞進行轉錄組學分析,更好的了解器官功能。如果使用有刺激性的酶解離類器官可能會破壞細胞表面標志物,從而影響后續對類器官中單細胞的研究。而羅氏Liberase包含冷活性蛋白酶,可以進行溫和解離,能夠保證獲得較高的細胞活率,也不會破壞細胞表面標志物,不會影響后續相關分析。Kumar等使用羅氏Liberase將20-30個類器官水解成單細胞用于后續進行單細胞轉錄組研究,解離條件為4℃處理20min。結果發現使用Liberase處理后收獲89.4%的單細胞,其中88.5% 的細胞是活細胞,不影響后續的單細胞轉錄組學分析。


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參考文獻

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1. 楊桃, 孫宇, 陳佳佳等. 類器官的研究進展. 中國細胞生物學學報, 2019 (3): 494-500.

2. Driehuis E, Kretzschmar K, Clevers H. Establishment of patient-derived cancer organoids for drug-screening applications. Nature protocols, 2020, 15(10): 3380-3409.

3. Linxweiler J, Hammer M, Muhs S, et al. Patient-derived, three-dimensional spheroid cultures provide a versatile translational model for the study of organ-confined prostate cancer. Journal of cancer research and clinical oncology, 2019, 145: 551-559.

4. Kumar S V, Er P X, Lawlor K T, et al. Kidney micro-organoids in suspension culture as a scalable source of human pluripotent stem cell-derived kidney cells. Development, 2019, 146(5): dev172361.


*僅供進一步加工處理工業使用 MC-CN-04016


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最近更新:2024-09-05 09:08:13
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