Ceturegel基質(zhì)膠應(yīng)用-胰腺癌類器官構(gòu)建流程！

2024-08-08 00:00:00 17閱讀次數(shù)

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2024年4月4日CA: A Cancer Journal for Clinicians期刊發(fā)布了最新的2022年全球癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）的最新評估數(shù)據(jù)，2022年全球癌癥新增病例1996萬例，全球癌癥死亡病例974萬例。2022年癌癥死亡病例數(shù)前十的癌癥分別是肺癌（182萬，18.7%）、結(jié)直腸癌（90萬，9.3%）、肝癌（76萬，7.8%）、女性乳腺癌（67萬，6.9%）、胃癌（66萬，6.8%）、胰腺癌（47萬，4.8%）、食道癌（44.5萬，4.6%）、前列腺癌（40萬，4.1%）、宮頸癌（35萬，3.6%）、白血病（30.5萬，3.1%）。

圖.2022年全球癌癥的病例和死亡分布類型

其中胰腺癌是一種惡性度高、治療效果差的腫瘤，胰腺癌的五年生存率約為10%，被醫(yī)學(xué)界稱為“癌中之王”。但是并非完全不能治療，對于早期發(fā)現(xiàn)的胰腺癌，可以通過根治性手術(shù)結(jié)合術(shù)后化療、放療等綜合治療。因此針對不同病人找到合適的治療藥物是關(guān)鍵所在。

胰腺癌類器官（organoids）是指利用胰腺瘤細(xì)胞等在體外培養(yǎng)出的3D細(xì)胞培養(yǎng)物并具有一定的空間結(jié)構(gòu)組織類似物。胰腺癌類器官可以作為疾病模型，相較于傳統(tǒng)2D疾病模型，其在闡明疾病的發(fā)展、穩(wěn)態(tài)性和發(fā)病機(jī)理等與體內(nèi)環(huán)境更加接近，能作為胰腺癌治療、診段和發(fā)病機(jī)制研究的理想試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>

胰腺癌類器官構(gòu)建實(shí)驗(yàn)步驟

取材：標(biāo)本離體后，盡快取材。采用無菌器械，保證無菌環(huán)境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中，4℃轉(zhuǎn)運(yùn);

清洗：在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復(fù)清洗后，去除 PBS；

重復(fù)清洗：重復(fù)第 2 步驟 3 次；

組織處理：去除 PBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代組織保存液的無菌培養(yǎng)皿中，用無菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）；

重復(fù)清洗：使用常溫PBS，重復(fù)第2步驟3次；

收集組織碎片，加入組織消化液消化，因胰腺癌組織較硬，消化需要時(shí)間30 min，重復(fù)2-3次，過70 μm篩網(wǎng)，收集胰腺癌細(xì)胞；

紅細(xì)胞裂解：加入10 mL紅細(xì)胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min；

重復(fù)清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12，重復(fù)第 2步驟3次；

類器官種板：調(diào)整細(xì)胞密度為2~3×10⁶，與Ceturegel基質(zhì)膠1:1均勻混合，將細(xì)胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入預(yù)熱的類器官培養(yǎng)液，每個(gè)孔 750 uL；

類器官培養(yǎng)：將培養(yǎng)板放在 37℃ CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每2天更換培養(yǎng)液。加入培養(yǎng)液時(shí)，吸頭朝向側(cè)壁，緩慢加入；

重復(fù)清洗：使用常溫PBS，重復(fù)第2步驟3次；類器官觀察：每天觀察類器官并拍照，了解初始類器官數(shù)量、增殖速度、形態(tài)、微生物污染情況等。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖.胰腺癌組織（上圖）和癌旁（下圖）類器官不同周期培養(yǎng)結(jié)果（P為培養(yǎng)代次，d為培養(yǎng)時(shí)間）

FAQ

基質(zhì)膠的操作要注意哪些事項(xiàng)？

所有操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。

獲取臨床樣本，如何避免污染？

①取材時(shí)盡量保證無菌取材；

②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見與外界環(huán)境有接觸可能的胃、腸、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min，其他常見腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右；
③提取細(xì)胞過程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素。

腫瘤組織采集、保存、運(yùn)輸注意事項(xiàng)

盡可能多采集腫瘤細(xì)胞含量高的腫瘤組織，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時(shí)間，以減少污染概率；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專用樣本保存液的無菌管中，低溫（4 ℃左右）下快速運(yùn)轉(zhuǎn)至檢測單位（盡量保證采樣后2~4 h內(nèi)送到）。

病灶和癌旁培養(yǎng)出的類器官有區(qū)別嗎？腫瘤組織的取材部位有什么要求？

有差別，腫瘤本身具有異質(zhì)性，不同來源的類器官之間存在差異是很常見的現(xiàn)象，從形態(tài)上看，原發(fā)病灶來源的類器官比癌旁來源的類器官更具有侵襲性的結(jié)構(gòu)，一般病灶形態(tài)上更加不規(guī)則一些。如果希望在建模或藥物篩選方面盡量減小誤差，可以在活性好的地方多位置取樣。

產(chǎn)品選擇

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
Cebrary^®Tissue Digestion Solution 組織消化液	41423ES10/30	10/30 mL
Cebrary^®Cell recovery solution for Organoid類器官回收液	41421ES30/60	30/100 mL
Cebrary^®Cell freezing medium for Organoid 類器官凍存液	41422ES30/60	30/100 mL
Cebrary® Pancreatic Cancer Organoid Growth Medium（Human）胰腺癌類器官生長培養(yǎng)基	41434ES60/76	100/500 mL
Ceturegel^® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠	40191ES08/10	5/10 mL

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品類型	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
基本濃度	Ceturegel^® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠	40183ES08/10	5/10 mL
基本濃度	Ceturegel^® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠	40184ES08/10	5/10 mL
低生長因子	Ceturegel^® Matrix GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠	40185ES08/10	5/10 mL
低生長因子	Ceturegel^® Matrix GFR， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠	40186ES08/10	5/10 mL
高濃度	Ceturegel^® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質(zhì)膠	40187ES08/10	5/10 mL
	Ceturegel^® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠	40188ES08/10	5/10 mL
	Ceturegel^® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠	40189ES08/10	5/10 mL
干細(xì)胞專用	Ceturegel^®Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質(zhì)膠	40190ES08/10	5/10 mL
鼠尾膠原	Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I (大鼠尾)	40125ES10/50	2/10 mL
鼠尾膠原	Cebrary^®Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾膠原蛋白I型 (小鼠尾)	40136ES10/50	2/10 mL

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