宮頸癌類器官構建實用寶典
2024年7月4日，成都生物制品研究所研制的四價HPV疫苗上市申請獲得NMPA受理，這也是國內自研首款四價的預防因人乳頭瘤病毒所引起的宮頸癌疫苗。根據國家癌癥中心基于腫瘤登記及隨訪監測最新數據，在JNCC上發布2022年中國惡性腫瘤疾病研究情況顯示【1】，子宮頸癌位列女性癌癥發病人數的前五位，發病增長率僅次于甲狀腺癌，因此防治需要同時進行，以減少病人發病率和延長存活期。
圖.信息源自CDE官網
宮頸癌類器官（organoids）是指利用宮頸腫瘤細胞等在體外培養出的3D細胞培養物并具有一定的空間結構組織類似物。宮頸癌類器官可以作為疾病模型，相較于傳統2D疾病模型，其在闡明疾病的發展、穩態性和發病機理等與體內環境更加接近，能作為宮頸癌治療、診段和發病機制研究的理想試驗模型。
宮頸癌類器官構建實驗步驟
1、取材：標本離體后，盡快取材。采用無菌器械，保證無菌環境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中，4℃轉運；
2、清洗：在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復清洗后，去除 PBS；
3、重復清洗：重復第 2 步驟 3 次；
4、組織處理：去除 PBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代 組織保存液的無菌培養皿中，用無菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）；
5、重復清洗：使用常溫PBS，重復第2步驟3次；
6、收集組織碎片，加入組織消化液消化20~30 min，過70 μm篩網，收集宮頸癌細胞；
7、紅細胞裂解：加入10 mL紅細胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min；
8、重復清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12，重復第 2步驟3次；
9、類器官種板：調整細胞密度為2~3×106，與基質膠1:1均勻混合，將細胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入預熱的類器官培養液，每個孔 750 uL；
10、類器官培養：將培養板放在 37℃ CO2培養箱培養,每2天更換培養液。加入培養液時，吸頭朝向側壁，緩慢加入；
11、類器官觀察：每天觀察類器官并拍照，了解初始類器官數量、增殖速度、形態、微生物污染情況等。
實驗結果
注：P為代次，d為培養天數
FAQ
基質膠的操作要注意哪些事項？
所有操作需在無菌環境下進行，應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀。
獲取臨床樣本，如何避免污染？
①取材時盡量保證無菌取材；
②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見與外界環境有接觸可能的胃、腸、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min，其他常見腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右；
③提取細胞過程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素。
腫瘤組織采集、保存、運輸注意事項
盡可能多采集腫瘤細胞含量高的腫瘤組織，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時間，以減少污染概率；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專用樣本保存液的無菌管中，低溫（4 ℃左右）下快速運轉至檢測單位（盡量保證采樣后2~4 h內送到）。
病灶和癌旁培養出的類器官有區別嗎？腫瘤組織的取材部位有什么要求？
有差別，腫瘤本身具有異質性，不同來源的類器官之間存在差異是很常見的現象，從形態上看，原發病灶來源的類器官比癌旁來源的類器官更具有侵襲性的結構，一般病灶形態上更加不規則一些。如果希望在建模或藥物篩選方面盡量減小誤差，可以在活性好的地方多位置取樣。
產品選擇
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產品名稱 |
產品編號 |
規格 |
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Cebrary®Tissue Digestion Solution 組織消化液 |
41423ES10/30 |
10/30 mL |
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Cebrary®Cell recovery solution for Organoid類器官回收液 |
41421ES30/60 |
30/100 mL |
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Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 類器官凍存液 |
41422ES30/60 |
30/100 mL |
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產品類型 |
產品名稱 |
產品編號 |
規格 |
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基本濃度 |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質膠 |
40183ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠 |
40184ES08/10 |
5/10 mL |
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低生長因子 |
Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質膠 |
40185ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix GFR， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠 |
40186ES08/10 |
5/10 mL |
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高濃度 |
Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質膠 |
40187ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠 |
40188ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質膠 |
40189ES08/10 |
5/10 mL |
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干細胞專用 |
Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質膠 |
40190ES08/10 |
5/10 mL |
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類器官專用 |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠 |
40191ES08/10 |
5/10 mL |
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鼠尾膠原 |
Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I |
40125ES10/50 |
2/10 mL |
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Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾膠原蛋白I型 |
40136ES10/50 |
2/10 mL |
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