Ceturegel?基質膠應用——肝癌類器官構建

2022-12-30 00:00:00 21閱讀次數

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據ourworldindata數據統計，截止到2019年，肝癌的死亡率位居中國所有癌癥死亡數的第四；據世界衛生組織國際癌癥研究機構（IARC）數據統計，2020年全球新發癌癥病例1929萬例，中國新發癌癥457萬例，其中肝癌在全球新發病例在91萬例，中國約41萬例，占全球的45%^[^1]。英國劍橋大學Broutier等人在2017年發表的一篇文章中開發出一種新的、接近原發性肝癌 (PLC) 的類器官，這項成果對肝癌病理生理的認識并實現藥物篩選上有極大的提升，該研究結果發表在《自然·醫學》雜志上^[^2]。

圖：源自ourworldindata

類器官（organoids）是指利用干細胞、祖細胞、腫瘤細胞等在體外培養出的3D細胞培養物并具有一定的空間結構組織類似物。作為疾病模型，相比于傳統2D疾病模型，類器官在闡明疾病的發展、穩態性和發病機理等與體內環境更加接近。類器官主要由成體干細胞或腫瘤樣本在適宜的培養條件下構建。與細胞外基質（基質膠）混合是關鍵的步驟之一，為類器官提供3D生長載體。基質膠主要成分由層粘連蛋白，Ⅳ型膠原，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）和巢蛋白等組成，還包含生長因子、組織纖溶酶原激活物和EHS腫瘤自身含有的其他生長因子。為組織和細胞提供支撐、抗拉強度和支架支撐等。翌圣生物開發生產的Ceturegel®基質膠不含LDEV（乳酸脫氫酶增高病毒），超低內毒素含量，并全部經過支原體檢測保證無支原體污染，包括基本濃度、高濃度、低生長因子等不同類型基質膠。

Ceturegel®基質膠

應用方向

產品特點

安全性高：不含LDEV（乳酸脫氫酶增高病毒）

濃度多樣性：濃度范圍在8~20 mg/mL之間

批次穩定性好：嚴格生產質檢過程保證批次間性能穩定

低內毒素：內毒素含量＜8 EU/mL

污染物檢測：經檢測無支原體和細菌、真菌殘留

產量高：產量在50L/月以上

兼容性好：可與任何類型的細胞培養基兼容

肝癌類器官構建

實驗步驟

1.將移液槍頭置于冰上預冷，基質膠置于冰上或4℃緩融，24孔細胞培養板置于37度預溫。

2.取對數生長期HepG2細胞，使用PBS輕柔潤洗并用胰蛋白酶消化細胞。

3.終止消化后制備并收集單細胞懸液，1500 rpm離心3min，棄上清并用DMEM完全培養基重懸細胞，調整細胞濃度為1.0×106cells/mL。

4.細胞接種：取緩融后的基質膠和調整好濃度的單細胞懸液1:1冰上輕輕混勻，用預冷的200μL移液槍頭取40~50μL上述混勻單細胞懸液垂直滴于預冷24孔板中，使其形成拱型細胞液滴。

5.于37℃、5%CO2飽和濕度的細胞培養箱內穩定30min后，每孔加入500~2mL肝癌類器官完全培養基繼續培養。

6.每天觀察并拍照記錄，約5-7天可觀察到均勻肝癌類器官。

實驗結果

圖：Hepg2細胞系源的類器官5天培養結果

FAQ

1.基質膠的操作要注意哪些事項？

所有操作需在無菌環境下進行，應使用預冷的移液器以保證基質膠呈勻漿狀。

2.基質膠的如何分裝凍存使用？

可將凍融后的Ceturegel®基質膠分裝在多個小管，所有分裝均需用預冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次。

3.不同孔板培養類器官培養所需的基質膠和培養基體積?

培養類器官常用的是24孔板培養，按50μl/孔形成膠滴，再加入500~800μl培養基覆蓋膠滴；96孔板按10μl/孔形成膠滴，再加入200μl培養基覆蓋膠滴；6孔板每孔可以種植多個50μl膠滴，加入2~3ml培養基覆蓋膠滴。

產品選擇

類型	貨號	產品名稱	應用方向
即用型 3-6 mg/ml	40182	Ceturegel® Matrix Ready-to-use，LDEV-Free基質膠	適應于細胞培養、貼壁、侵襲和遷移實驗以及細胞分化等研究
基本濃度 8-12 mg/ml	40183	Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質膠	適應于2D和3D培養、侵襲和遷移實驗，也可以用于體內成瘤實驗
基本濃度 8-12 mg/ml	40184	Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠	主要應用于需要顏色檢測如熒光檢測實驗等
高濃度 ≥18mg/ml	40187	Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質膠	主要應用于如血管生成、凝膠栓塞和體內成瘤實驗（對于血管生成建議基質膠終濃度要≥10mg/ml）
	40189	Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質膠
	40188	Ceturegel® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠
低生長因子	40185	Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質膠	主要是排除生長因子對實驗的干擾。應用于與生長因子、信號通路等相關研究。無酚紅的也用來做類器官培養
低生長因子	40186	Ceturegel® Matrix GFR，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠	主要是排除生長因子對實驗的干擾。應用于與生長因子、信號通路等相關研究。無酚紅的也用來做類器官培養
干細胞用	40190	Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質膠	主要用于如hESC，iPSC等干細胞培養
類器官用	40191	Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質膠	類器官培養專用基質膠
鼠尾膠原	40125	Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I（大鼠源）	侵襲和遷移。培養或分化研究
鼠尾膠原	40136	Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail 鼠尾膠原蛋白I型（小鼠源）	侵襲和遷移。培養或分化研究

相關產品

產品名稱	產品編號	規格
Cebrary®Cell recovery solution for Organoid 類器官回收液	41421ES30/60	30/100mL
Cebrary®Cell freezing for Organoid 類器官凍存液	41422ES30/60	30/100mL
Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse)小鼠腸類器官生長培養基	41426ES60/76	100/500mL
Cebrary® Liver Cancer Organoid Growth Medium (Human) 肝癌類器官生長培養基	41429ES60/76	100/500mL

[1] https://www.iarc.who.int/faq/latest-global-cancer-data-2020-qa/

[2] Broutier, L., Mastrogiovanni, G., Verstegen, M. et al. Human primary liver cancer–derived organoid cultures for disease modeling and drug screening. Nat Med 23, 1424–1435 (2017). https://doi.org/10.1038/nm.4438

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