卵巢癌類器官構(gòu)建實(shí)用寶典
每年的5月8號是“世界卵巢癌日”，根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥發(fā)病數(shù)據(jù)報(bào)告顯示：2020年中國新發(fā)癌癥病例457萬例，其中男性248萬例，女性209萬例，2020年中國癌癥死亡病例為300萬例，其中男性182萬例，女性118萬例，在婦科三大腫瘤中卵巢癌的死亡率排名第一。
圖.2020年中國女性癌癥新發(fā)病例數(shù)前十類型
卵巢癌類器官（organoids）是指利用卵巢瘤細(xì)胞等在體外培養(yǎng)出的3D細(xì)胞培養(yǎng)物并具有一定的空間結(jié)構(gòu)組織類似物。卵巢癌類器官可以作為疾病模型，相較于傳統(tǒng)2D疾病模型，其在闡明疾病的發(fā)展、穩(wěn)態(tài)性和發(fā)病機(jī)理等與體內(nèi)環(huán)境更加接近，能作為卵巢癌治療、診斷和發(fā)病機(jī)制研究的理想試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>
卵巢癌類器官構(gòu)建
1、取材：標(biāo)本離體后，盡快取材。采用無菌器械，保證無菌環(huán)境，將腫瘤組織放入含有5 mL的原代組織保存液的 15 mL 離心管中，4℃轉(zhuǎn)運(yùn)。
2、清洗：在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復(fù)清洗后，去除 PBS。
3、重復(fù)清洗：重復(fù)第 2 步驟 3 次。
4、組織處理：去除 PBS緩沖液后，將組織塊移至10 cm含10 mL冷原代 組織保存液的無菌培養(yǎng)皿中，用無菌眼科顯微剪將組織剪碎（直徑約 0.5mm~1mm）。
5、重復(fù)清洗：使用常溫PBS，重復(fù)第2步驟3次。
6、收集組織碎片，加入組織消化液消化20~30 min，過70 μm篩網(wǎng)，收集卵巢癌細(xì)胞。
7、紅細(xì)胞裂解：加入10 mL紅細(xì)胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min。
8、重復(fù)清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12，重復(fù)第 2步驟3次。
9、類器官種板：調(diào)整細(xì)胞密度為2~3×106，與基質(zhì)膠1:1均勻混合，將細(xì)胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入預(yù)熱的類器官培養(yǎng)液，每個(gè)孔 750 uL。
10、類器官培養(yǎng)：將培養(yǎng)板放在 37℃ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),每2天更換培養(yǎng)液。加入培養(yǎng)液時(shí)，吸頭朝向側(cè)壁，緩慢加入。
11、類器官觀察：每天觀察類器官并拍照，了解初始類器官數(shù)量、增殖速 度、形態(tài)、微生物污染情況等。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖.卵巢癌類器官不同周期培養(yǎng)結(jié)果（P為培養(yǎng)代次，d為培養(yǎng)時(shí)間）
FAQ
基質(zhì)膠的操作要注意哪些事項(xiàng)？
所有操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。
獲取臨床樣本，如何避免污染？
①取材時(shí)盡量保證無菌取材；
②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見與外界環(huán)境有接觸可能的胃、腸、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min，其他常見腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右；
③提取細(xì)胞過程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素。
腫瘤組織采集、保存、運(yùn)輸注意事項(xiàng)
盡可能多采集腫瘤細(xì)胞含量高的腫瘤組織，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時(shí)間，以減少污染概率；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專用樣本保存液的無菌管中，低溫（4 ℃左右）下快速運(yùn)轉(zhuǎn)至檢測單位（盡量保證采樣后2~4 h內(nèi)送到）。
病灶和癌旁培養(yǎng)出的類器官有區(qū)別嗎？腫瘤組織的取材部位有什么要求？
有差別，腫瘤本身具有異質(zhì)性，不同來源的類器官之間存在差異是很常見的現(xiàn)象，從形態(tài)上看，原發(fā)病灶來源的類器官比癌旁來源的類器官更具有侵襲性的結(jié)構(gòu)，一般病灶形態(tài)上更加不規(guī)則一些。如果希望在建模或藥物篩選方面盡量減小誤差，可以在活性好的地方多位置取樣。
產(chǎn)品選擇
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
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Cebrary®Tissue Digestion Solution 組織消化液 |
41423ES10/30 |
10/30 mL |
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Cebrary®Cell recovery solution for Organoid類器官回收液 |
41421ES30/60 |
30/100 mL |
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Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 類器官凍存液 |
41422ES30/60 |
30/100 mL |
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Cebrary® Ovarian cancer Organoid Growth Medium (Human)卵巢癌類器官生長培養(yǎng)基 |
41433ES60/76 |
100/500 mL |
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品類型 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品編號 |
規(guī)格 |
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基本濃度 |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 |
40183ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40184ES08/10 |
5/10 mL |
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低生長因子 |
Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40185ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix GFR， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40186ES08/10 |
5/10 mL |
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高濃度 |
Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40187ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40188ES08/10 |
5/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40189ES08/10 |
5/10 mL |
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干細(xì)胞專用 |
Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40190ES08/10 |
5/10 mL |
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類器官專用 |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40191ES08/10 |
5/10 mL |
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Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I |
40125ES10/50 |
2/10 mL |
|
|
Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾膠原蛋白I型 |
40136ES10/50 |
2/10 mL |
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